虫草深层发酵的培养条件和培养基优化研究.pdfVIP

江苏农业科学 2008年第6期 一 85一 虫草深层发酵的培养条件和培养基优化研究 刘小莉，周剑忠，王 英，李 剑，黄开红 (江苏省农业科学院农产品加工研究所，江苏南京2113014) 摘要：以菌丝体干重、腺苷含量及腺苷总量为指标，研究温度、初始pH值、碳源、氮源和金属离子等因素对蛹虫草液体培养的影响。 结果表明，蛹虫草液体摇瓶培养的最佳温度为20℃，初始pH值为4．0，最适培养基组成为糖蜜20g／L、玉米浆lOg／L、氯化钙0．5g／L、 磷酸二氢钾0．5g／L、磷酸氢二钾0．5g／L、维生素 B。0．1g／L。在优化的培养条件下，蛹虫草菌丝体生物量为 15．55g／L，腺苷含量为 6．26mg／g，腺苷总量为97．25mg／L。 关键词：蛹虫草 ；腺苷 ；生物量；液体发酵 中图分类号：TS201．21 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2008)06—0085—02 虫草是我国特有的名贵药用真菌，多生于海拔3000～ 1．2．3 菌丝体中腺苷 的检测 采用改良的高效液相色谱 4000m的高山草甸土层中，具有扩张气管、镇静、抗心律失 法 。菌丝体加液氮研磨成粉末，称取粉末0．05g加入2ml 常、降血压、抗病原微生物 、抗恶性肿瘤等多种药理活性u 。 纯净水，超声波 100W、60℃处理 50rain，12000r／rain离心 由于生长环境和寄生条件特殊，再加上人们不断采挖，环境不 10rain取上清，重复提取3次，上清合并过0．45 m滤膜后进 断遭到破坏，虫草天然资源非常紧张 。因此，国内外一直 行高效液相色谱检测。色谱条件 ：色谱柱ZORBAXSB—C18 致力于虫草菌丝体的人工培养，通过液体深层发酵培养可以 (4．6mm×250mm，5Ixm)；柱温30oC；进样量20FL1；流动相 ： 快速生产食药用真菌菌丝体，缩短传统固体培养时间，节约生 水 一甲醇 (85：15)，流速 1ml／min；检测器波长 260llm。 产成本 。目前国内市场上出现了较多的人工培养菌丝体 1．2．4 数据分析 试验数据采用SPSS13．0软件进行显著 产品，如金水宝胶囊、百灵胶囊等，但这些产品说明中仅标明 性方差分析(0c=0．05)。 菌粉含量 ，而无具体的特征性有效成分的标志 。 2 结果 腺苷、虫草素等核苷类成分是虫草中主要成分，且腺苷是 虫草素的直接前体 J。本试验以液体发酵虫草菌丝体产量 2．1 最适温度 及其中腺苷的含量为指标，研究虫草液体发酵的最适培养条 蛹虫草C一8菌株在 l5—30℃下均能生长 ，但20℃下菌 件和培养基组成。 丝生长量和腺苷含量显著高于其他温度条件 (表 1)。因此， 选择C一8菌株最适培养温度为2O℃。 1 材料与方法 表 1 不同温度条件对菌体生长和产物的影响 1．1 材料和试剂 蛹虫草(Cordycepsmilitaris)C一8菌株为本研究室保存。 种子培养基：土豆葡萄糖液体培养基 ，土豆200g，葡萄糖 20g，KH2PO0．5g，MgSO41g，维生素Bj0．1g，水 l000ml。 发酵培养基：葡萄糖 20g，酵母 膏 5g，蛋 白胨 5g， K2HPO40．5g，KH2PO40．5g，MgSO0．5g，维生素 Bl0．1g， 水 1000ml。 1．2 方法 2．2 培养基初始 pH值 1．2．1 菌种活化和培养 虫草新鲜菌丝块接种于种子培养 蛹虫草C一8菌株能适应较宽的pH值范围，在pH值2 基中，2