江苏省2个日本沼虾群体的遗传多样性分析.pdfVIP

江苏农业科学 2011年第 39卷第 4期 一 293一 郭 闯，邹宏海 ，盖建军，等．江苏省2个 日本沼虾群体的遗传多样性分析 [J]．江苏农业科学，2011，39(4)：293—295 江苏省2个 日本沼虾群体的遗传多样性分析 郭 闯，邹宏海 ，盖建军 ，陈焕根 ，王明宝，龚培培 (江苏省水产技术推广站，江苏南京 210036) 摘要 ：利用 ISSR分子标记技术对江苏长江和太湖 2个地区日本沼虾群体的遗传多样性进行了分析。结果显示： 77个 IS$R引物中有6个引物能扩增出清晰条带，6个引物对 2个群体各 24个样品扩增出44个位点。日本沼虾长江 和太湖两群体的多态位点比率均为63．64％，Shannon’s指数分别为0．3480和0．3465。Shannon’S指数估算和AMO— VA分析均显示 日本沼虾的遗传变异主要来 自于群体内个体问。 日本沼虾UPGMA系统树表明：2个地区 日本沼虾群 体的遗传多样性均处于较高水平 ；日本沼虾在江苏长江和太湖2个群体间存在一定的遗传分化。 关键词：日本沼虾；ISSR；遗传多样性；遗传分化 中图分类号 ：s961．2 1 文献标志码 ：A 文章编号 ：1002—1302(2011)04—0293—02 日本沼虾 (Macrobrachiumnipponense)俗称青虾 、河虾 ，广 上稍作修改，PCR反应在德国Biometre公司的Gradient梯度 泛分布于我国各地的江河、湖泊、水库 、池塘及沟渠中，是我国 PCR仪上进行，确定 ISSR—PCR的最佳反应体系为：总体积 野生淡水虾类中的重要种类，也是我国重要的淡水养殖虾类 25 ，其 中模 板 DNA1 (约 30ng)，2．5mmol／LMg 之一，现已成为我国养殖面积最广 、产量最大的淡水经济养殖 2．5 L，10 reotol／L dNTP 2．0 IxL，1U Taq 酶 1 L， 虾类。目前主要采用 RAPD…、线粒体部分序列片断 COI 0．25tzmol／L~I物 1 L。扩增程序为：94℃2min；94oClmin， 以及线粒体DNA16SRNA基因片段分析 等方法，对我国部 53oC 1min，72℃ 1min，40个循环 ；72℃ 10min。 分地区主要养殖水体中的日本沼虾遗传多样性进行了研究 ， 表 1 6个 ISSR引物在48个 日本沼虾个体间的扩增情况 但未见有对我国日本沼虾种质资源遗传结构变异以及系统进 化情况进行系统分析和评估的相关报道。本研究利用 ISSR 技术对江苏长江和太湖2个 日本沼虾群体的种群遗传结构及 遗传多样性进行研究，以期为了解其遗传背景提供基础资料。 1 材料与方法 1．1 试验 材料 日本沼虾长江群体样品于 2009年 7月捕于江苏长江扬 中水域 (119。49E，32。14N)；太湖群体样品于2009年6月 PCR产物用 1．5％琼脂糖(EB的浓度为0．5ng／tzL)凝胶 捕于江苏太湖吴江水域 (119。55E，30。47N)。取样品尾部 电泳检测 ，电压 5V／cm，DL2000Marker(TaKaRa公司产 品) 肌肉组织于无水乙醇中，一20℃保存备用。两群体各取 24 作为分子量标准，UVP凝胶成像系统记录图像。 尾 ，雌、雄各 12尾。PCR相关试剂均为 TaKaRa公司产品。 1．3 数据处理 1．2 试 验 方 法 将 ISSR电泳图谱记录后进行人工读带，同一引物扩增 的 1．2．1 基因组 DNA提取 基因组 DNA提取参照北京鼎国 电泳迁移率一致的条带被认为具有 同源性，属于同一位点的 昌盛生物技术有限责任公司动物组织基因组 DNA提取试剂 产物 ，有带且清晰的记为 1，无带及模糊带的记为 0，得出0，l 盒操作说明书进行 ，检测 DNA溶液浓度与纯度，并将浓度稀 原始数据矩阵。利用POPGEN32计算遗传相似度 、遗传距离