PRRSV GP5蛋白和CSFV E2蛋白在杆状病毒囊膜表面的共展示及展示蛋白的免疫原性分析.pdfVIP

畜牧兽 医学报 2011，42(6)：892～898 ActaVeterinariaetZootechnicaSinica PRRSVGP5蛋白和 CSFVE2蛋白在杆状病毒囊 膜表面的共展示及展示蛋 白的免疫原性分析 许信刚，王志异，李兆才，张 琪，童德文 (西北农林科技大学动物医学院，杨凌 712100) 摘 要：本试验 旨在构建以杆状病毒表面展示系统为基础的猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟双价基因工程亚单位疫苗 候选株 。利用杆状病毒表面展示技术构建展示猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)GP5蛋 白和猪瘟病毒 (CSFV) E2蛋 白的重组杆状病毒 BacSC—Dual—ORF5一E2。该重组病毒带有 His6标签 ，且胞质区域 (CTD)和跨膜 区域(TM) 均来源于杆状病毒囊膜蛋 白gp64的CTD和 TM。对重组病毒进行 Westernblot分析、激光共聚焦显微镜观察、免 疫金 电子显微镜检测、动物免疫试验以及淋 巴细胞增殖试验。Westernblot分析结果表 明，重组杆状病毒 中表达 了 重组 GP5和 E2蛋 白；激光共聚焦显微镜检测表 明，重组杆状病毒感染 昆虫细胞 Sf一9后在细胞膜上展示 了重组 GP5和E2蛋 白；免疫金 电子显微镜观察表明，重组 GP5和E2蛋 白展示在杆状病毒囊膜上 ；动物免疫试验表明，重 组杆状病毒免疫小 鼠后产生了抗 PRRSV和抗 CSFV 的特异性抗体 ；淋巴细胞增殖试验表明，重组杆状病毒能诱发 较强的细胞免疫应答 。本试验成功构建表面展示 PRRSVGP5蛋 白和CSFVE2蛋 白的重组杆状病毒 ，为下一步应 用该重组杆状病毒作为双价亚单位疫苗预防PRRSV和 CSFV 的混合感染奠定基础 。 关键词 ：杆状病毒表面展示系统；PRRSV；CSFV；GP5蛋 白；E2蛋 白 中图分类号 ：$852．65 文献标识码 ：A 文章编号 ：O366—6964(2011)06—0892—07 BaculovirusSurfaceDisplayofGP5EnvelopeGlycoprotein ofPRRSV andE2Envelope GlycoproteinofCSFV and ImmunogenieityAnalysisoftheDisplayedProteins XU Xin-gang，WANG Zhi-sheng，LIZhao—cai，ZHANG Qi，TONG De-wen (CollegeofVeterinaryMedicine，NorthwestAFUniversity，gangling712100，China) Abstract：Theaim ofthisstudywasto develop porcinereproductiveandrespiratory syndrome (PRRS)andclassicalswinefever (CSF)divalentgeneticengineering subunitvaccinebasedon baculovirussurfacedisplaysystem．OnerecombinantbaculovirusesBacSC—Dual～GP5一E2express inghistidinetaggedPRRSV GP5protein andCSFV E2proteinwith theCTD andTM derived from baculovirusenvelopeprotein gp64 wereconstructed ． Therecombinantbaculoviruseswere analyzedbyW estern blot，immunofluorescenceconfocalm icroscopy，immunogoldeleCtronmicros— copy，animalvaccinetestsand lymphocyteproliferativeresponses．Afterinfection，GP5an