RNA干扰及其应用综述.pdfVIP

维普资讯 第 18卷 第 1期 潍 坊 教 育 学 院 学 报 Vo1．18 No．1 2005矩 第 1期 JOURNALOFWEIFANG EDUCATIONALCOLLEGE Mar．2005 RNA干扰及其应用综述 曹 安 堂 (潍坊教育学院生命与环境工程系 ，山东 青州 262500) 摘要：RNA 干扰 (RNAinterference，RNAi)是真核生物中普遍存在的一种 自然现象，是由双链 RNA (double—strandedRNA，dsRNA)启动的序列特异的转录后基因沉默过程 。在这一过程 中，双链 RNA被核 酸 内切酶切割戍小干扰 RNA(smallinterferingRNA，siRNA)，小干扰 RNA 与相关 的蛋 白质 结合成 RNA 诱 导沉默复合体 (siRNA--inducedsilencingcomplex，RISC)，RISC识别并降解靶 mRNA。现在认为RNA 干扰是真核生物共有的抗病毒、抗转座子、抗转基 因和抗异常RNA 的基 因组免疫系统。随着 RNA 干扰的研 究，产生了一种新的技术——RNA干扰技术，并得到了广泛的应用 。 关键词 ：RNAi；dsRNA；siRNA；RNAi系统 ；基 因组免疫 中图分类号 ：Q343．1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1OO9—2080(2005)01—0045--05 1 RNAi的发现 在的在进化上 比较保守的免疫机制，又被称为基因组免疫 。 1990年，Jorgensen拟将紫色素基因导入矮牵牛花中以期 2 RNA 干扰系统的组成 加深花 的颜色时 ，却发现花色不仅没有加深，反而变淡甚至呈 RNA干扰系统的组成 尚未完全搞清楚 ，已知的包括下列 完全 的白色，这说明外源基因和内源基因的表达同时被抑制 成员。 了。Jorgensen称此现象为共抑制 (co--suppression)…。1994 2．1双链 RNA和小干扰 RNA 双链 RNA，即dsRNA， 年 ，Macino和Cogoni在进行粗糙脉孢霉转基因研究时，发现 它是RNA干扰的触发因子 。转基因、侵入细胞的病毒和转座 了 存在 于真菌 中的 类 似 现 象 ，他 们称 之为 基 因压 制 因子活动时都能产生双链 RNA。RNA病毒进入细胞后 ，通过 (quelling)。后来 ，这些奇怪现象在其它植物和真菌中都有发 RNA 依赖 性 RNA 聚合酶 (RNA—dependentRNA poly— 现 ，甚至发现当有病毒感染植物时亦 出现类似现象 ，但未能作 merase，RdRP)的作用 ，以病毒RNA 为模板合成其 RNA 的 出合理的解释 。1995年，Guo和 Kempheus等在 以反义 RNA 互补链 ，并与之结合形成 dsRNA；DNA 病毒、重组基因和转 技术研究秀丽线虫 (C．elegans)中 par一1基 因的功能时，意 基因等 DNA序列是在细胞转录出RNA后 ，经 RdRP作用产 外地发现反义 RNA和正义 RNA都阻断了该基因的表达 ]。 生其互补链并形成 dsRNA；而转座子 由于其本身具反向重复 而按 照常理，正义 RNA应 是增强该基因表达的。1998年， 序列可直接产生dsRNA。这些双链 RNA被核酸酶切割成 21 Fire和Mello等将体 外转录合成并经纯化得到的单链 RNA — 23nt(nucleotide)的小干扰 RNA，即siRNA。siRNA是PT— (反义RNA 或正义 RNA)注射给秀丽线虫，基因抑制效应极 GS的诱导因子，具有明显 的特征：具 5’末端单磷酸和 3’羟基 微弱 ；而将正、反义链构成的双链 RNA(dsRNA)纯化后注射 末端 ，互补链的 3’末端均有 2—3nt的单链突 出[43。siRNA除 给线虫，却能特异地阻断相应基因的表达 ，他们称此现象为 了由dsRNA酶切产生外 ，还存在 内源性 siRNA。内源性 siR— RN