昆明小鼠胚胎干细胞建系的初步研究.pdfVIP

V第 ；7鲞 o1．27。 赢2期 J f gAg． Bi。。i。 20D0e8c年．．122o@月 文章编号 ：10o8—3464 (2008)04—0329—06 昆明小鼠胚胎干细胞建系的初步研究 戢开丽，仇恒滨，严为巧，庄新杰，段亚苹，张明，卢盛晟，卢克焕 (广西大学 动物繁殖研究所，广西 南宁530005) 摘要：以昆明小鼠 (MusmUsculus)为材料 ，利用超数排卵获得小鼠扩展囊胚、孵化囊胚。为了研究 小 鼠胚胎干细胞 (MouseEmbryonicStemCells，mESC)分离和传代 的影响因素，设计两个实验 ： (1)不 同孕期 (3．5d或4．5d)的囊胚对胚胎干细胞分离效率的影响；(2)第 5代后，不同传代方法 (机械法或 酶消化法)对 mESC传代的影响。结果显示：在 3．5d孕期时，胚胎为扩展囊胚 ，在 4．5d时为孵化囊胚， 扩展囊胚在贴壁率 、原代克隆形成率差异不显著 ，从在继代培养上显著高于孵化囊胚 (P0．05)；第 5代 后用机械法或胰酶消化法传代对 mESC的维持没有 明显差别，但从克隆的形态上看 ，酶消化法优于机械 法 。最后 ，本研究从扩展囊胚组 中成功获得 了一株 mESC，该 mESC碱性磷酸酶染色呈强阳性，经RT-PCR 分析显示表达 Oct4、Sox2，核型为正常 40XY。 关键词 ：昆明小 鼠；囊胚 ；胚胎干细胞 ；机械法 ；酶消化法 中图分类号 ：Q254；Q959．837 文献标识码 ：A Primarystudyonestablishmentofembryonicstem cells from Kunm ingmouse JIKai—li，QIU Heng—bin，YAN Wei—qiao，ZHUANG Xin-jie，DUANYa—ping， ZHANG M ing，LU Sheng—sheng。LU Ke—huan (AnimalReproductionInstitute，GuangxiUniversity，Nanning530005，China) Abstract：In thestudy，theexpandedandhatchedblastocystswereused，whichwereobtained from Kunmingmousesbysuperovulation，toobservethefactorsaffectingtheisolationandsubculture ofthemouseembryonic stem cells (mESC)．Two experimentsweredesigned：Experimentone focusedon the effectofpregnancy states (3．5d or4．5 d) on mESC isolation and subculture； ExperimenttWOfocusedontheeffectofpassagingmethods (mechanicalorenzymaticmethod)onthe mESC subcultureafter passage 5．The results showed that the 3．5d blastocysteswere expanded whereasthe 4．5d blastoeysts were hatched．The difference between the expanded and hatched blastocystswasnotsignificantatattachmentandprimarycoloniesformationrate，butthesubculture ofmESCfrom expandedblastocystswerebetterthanthemESCfrom hatchedblastocysts(P 0．05)． Afterthefifthpassage，judgedfrom themorphology，theenzym