猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞受体Sn和CD163 TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立.pdfVIP

第34卷 第4期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vo1．34 No．4 2012 年 4 月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine Apr． 2012 doi：10．3969~．issn．1008—0589．2012．04．11 猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞受体 Sn和 CD163TaqMan 荧光定量 RT—PCR方法的建立 韩梓峰 1,2，刘永刚 ，石文达 ，王 刚 ，何玉利 ，王淑杰 ，刘 鹤 ， 董建国 ，武嘉男 ，蔡雪辉 (1．东北农业大学 ，黑龙江 哈尔滨 150001； 2．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室 ／基础诊断研究室，黑龙江 哈尔滨 150001) 摘 要 ：为建立检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV1允许细胞表面的Sn和 CD163受体的方法，本研究设 计针对 sn和 CD163基因的特异性引物和荧光探针，建立了检测PRRSVSn和 CD163受体的荧光定量 RT．PCR方 法。结果显示，该方法在检测 10copies／txL 10copies／txL模板范围内具有 良好的线性关系。标准曲线的相关系 数 r值均大于0．996，扩增效率分别为 100％和 107％；该检测方法对 Sn和 CD163的检测下限均为 10拷 贝，敏 感性高；批 内重复试验和批间重复试验的变异系数均小于 5％，具有 良好的重复性。利用该方法对 PRRSV感染 肺泡巨噬细胞(PAM)72h后 Sn和 CD163受体mRNA 的转录水平进行了检测，结果表明Sn和 CD163受体的转录 水平显著上调。本研究为PRRSV病毒感染后两种主要受体变化趋势的研究提供了有效的检测方法。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；Sn受体 ；CD163受体 ；荧光定量 RT．PCR 中图分类号 ：$852．65 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008—0589(2012)04．0297．04 EstablishmentofTaqManfluorescencequantitativeRT—PCR assay forPRRSV SnandCD163receptordetection HANZi-feng，，L1UYong—gang2，SHIWen-da，WANGGang2，HEYu—li，WANGShu-jie， LIU He，DONG Jian—guo，WU Jia-nan，CAIXue—hui，。 (1．NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150001，China；2．DivisionofSwineInfectiousDiseases，StateKeyLaboratoryof VeterinaryBiotechnology，HrabinVeterinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China) Abstract：Fordetectionreceptorofporcinereproductiveandrespiratory syndromevirus(PRRSV)inpermissivecells，areal timeTaqManRT—PCRwasdevelopedusingspecificprimersandfluorogeneticprobebasedonthegeneofSnandCD163receptor ofPRRSV ．Theestablishedmethodhadalineardnyamicrnagefrom 10 copies／FL to 10 copies／~L．Theresultdemonstratedthat thereal—timeRT—PCR assaywashighlyspecificandsens