简便快捷的小鼠胰岛分离纯化方法研究.pdfVIP

昆明医科大学学报 2012 ，（8 ）：6 9 CN 53 - 1049 R Journal of Kunming Medical University 简便快捷的小鼠胰岛分离纯化方法研究 １） １） １） ２） ２） １） 合湫 ，苏 恒 ，李 超 ，沈 涛 ，严新民 ，薛元明 （1 昆明医科大学附属昆华医院，云南省第一人民医院内分泌科；2 基础研究所，云南 昆明 650032 ［摘要］ 目的 探讨小鼠胰岛分离与纯化的方法．方法 采用多点注射灌注胶原酶法消化胰腺，不连续密度 梯度离心联合人工挑取的方法分离、纯化胰岛．双硫腙特异性染色后计算胰岛产量及纯度．葡萄糖刺激后测定培 、纯化法平均得 （ ，平 养上清液胰岛素水平检测胰岛功能．结果 （1）每只小鼠采用上述分离 114 ±15）个胰岛 （ 、 均纯度为 77.12 ±3.23）% ，胰岛细胞存活率 90% ； （2）分离、纯化的胰岛培养上清液中胰岛素水平在无糖 低糖（2.8 mmol/L）和高糖（22.2 mmol/L）刺激下分别为 （23.80 ±3.52）mIU/ L 、（67.57 ±4.04）mIU/ L 和 （164.32 ±10.75）mIU/ L ，各组间比较，差异有统计学意义 （＜0.05 ）．两两比较，低糖组的胰岛素水平为无糖组 （ （ 的2.84 倍 ＜0.05），高糖组的胰岛素水平为低糖组的2.43 倍 ＜0.05），高糖组的胰岛素水平为无糖组的6.90 倍 （＜0.05 ）．结论 采用多点注射灌注胶原酶法消化胰腺，不连续密度梯度离心联合人工挑取的方法分离、纯 化的小鼠胰岛产量及纯度较高，形态完整，不同浓度葡萄糖刺激后胰岛素分泌反应良好，是一种简便、快捷的小 鼠胰岛分离方法． ］ ；多点注射；分离纯化 ［关键词 小鼠胰岛 ］ ］ ］ ［中图分类号 R392.12 ［文献标识码 A ［文章编号 1003 －4706 （2012）08 －0006 －04 A Convenient and Efficient Method of Mouse Pancreatic Islet Isolation and Purification HE Qiu １），SU Heng １），LI Chao １），SHEN Tao ２），YAN Xin －min ２），XUE Yuan －ming １） （1）Dept. of Endocrinology ； ）Basic Research Institute ，The A ffiliated Kunhua Hospital of Kunming Medical Univ ersity ，The First People ’s Hostpital of Y unnan Prov ince ，Kunming Y unnan 650032 ，China） Abstract］Objective To investigate a convenient and efficient method of mo