枯草芽胞杆菌重组木聚糖酶基因高效表达系统的构建.pdfVIP

维普资讯 农业生物技术学报 JournalofAgriculturalBiotcchnology 2007，15 (1)： 133～137 · 研究论文 · 枯草芽胞杆菌重组木聚糖酶基因高效表达系统的构建 水 王丽萍，彭德奎 ，陈守文，喻子牛，孙 明++ (华中农业大学农业微生物国家重点实验室，武汉430070) 摘要：以木聚糖酶基因为研究对象，构建了枯草芽胞杆菌(Bacillussubtilis)稳定的高效表达系统。采用PCR方法从芽胞杆 菌(Bacillussp．)基因组DNA中分别扩增出完整和不带启动子的木聚糖酶(xynA)基因；利用芽胞杆菌的强启动子，即s．层蛋白 的启动子，通过 SOE(splicingbyoverlappnigextension)法连接到xynA基因上得到重组基因S-xynA，将 xynA和S-xynA分别装 载到整合载体pDG1730上 ，转化Ot．淀粉酶高产菌株枯草芽胞杆菌B47，将重组基因整合到Ot．淀粉酶基因上 ，以期 目标基因像 淀粉酶基因一样高效表达。结果表明，2个重组菌的产酶活性均得到提高，其中s．层蛋白启动子表达的木聚糖酶活是 自身启动 子表达的酶活的 1．69倍。重组表达的木聚糖酶在pH5—8和40~0~C范围内均具有较高活性。 关键词：枯草芽胞杆菌；木聚糖酶；同源重组；整合 中图分类号：S188 文献标识码：A 文章编号：1006-1304(2007101．0133．05 ConstructionofaHigh·effectiveExpressionSystem ofBacillus subtilisRecombinedXylanaseGene WANGLi-ping,PENGDe-kui，CHEN Shou-wen，YUZi-niu，SunMing¨ (StateKeyLaboratoryofAgriculannlMicrobiology,HuazhongAgriculturalUniversityWuhan430o70,Chnia) ^b—髓陡 A stableandhigh-effectiveexpressionsystem wasconstructde niBacillus subtiliswithxylanas~gene．Thecomplete and promoterlessxynA gne ewb~1．eamplifiedfrom Bacillus sp．by PCR,respectively．AndthelaRerwasligatedwith thes~ong promoterofB．thuringiensisS-layerproteintoconstructrecombinantS-xynA gene．Th exyaA geneandrecombinantS-xynA gene wererespectivelyinsertednitointegrationvectorpDG1730．Th entherecombniantvectorwasstablyinsertedni betweenamyE-front nadamyE-backofB．subti~sB47，whichproduceshihg quantityOt-amylase，niorderthathtexylnaasecouldbehihglyexpressedaS Ot-amylase．Th eresultshowedhtathtexylanaseactivityofwtorecombinantstraniswere boht nicreasde nadhteactiviyt ofxylnaase expressedwihtS-layerpromoterWas 1．69timesthanthatwihtnativepromoter．Therecombinantexpressedxylnaaseactivitywashihg at