蛞蝓提取物抗肺癌的作用机制研究.pdfVIP

湖 南 中 医 药 大 学 学 报 2011年 7月第 31卷第 7期 6 JournalofTCM Univ．ofHunan Ju1．2011Vo1．31No．7 · 方药研究 · 蛞蝓提取物抗肺癌的作用机制研究 谢金魁 ，曹建 国 ，张安强 ，王 娟 (1．广州汉方现代 中药研究开发有限公司，广东 广州 520240；2．湖南师范大学医学院药物工程实验室，湖南 长沙 410006； 3．浙江工业大学生物环境工程学院，浙江 杭州 310014；4．南华大学药物药理研究所，湖南 衡阳 421001) [摘要] 目的 探讨蛞蝓提取物(EL一3)抗肺癌的作用机制。方法 (1)溴化尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法观察EL一3对 人源性肺癌A549细胞的掺入抑制率；(2)吖啶橙 ／溴化乙~(AOE／B)染色荧光显微镜，观察EL一3诱发A549凋亡细 胞的形态，计数凋亡细胞；PI染色流式细胞术(FCM)分析细胞用期和凋亡率。(3)DNA琼脂糖凝胶 电泳法，观察凋亡 细胞 “梯形”DNA条带；(4)免疫组化 DAB染色法观察EL一3对PCNA、VEGF、CD31的蛋白表达的影响。结果 (1)单 用蛞蝓提取物 100 ~[g／mL浓度 的EL一3对人肺癌细胞 A549核酸合成抑制率 (IR)高达 63．59％；与空 白对照组f0)和 溶媒对照~i1(7．54％)比较差异有统计学意z(Po．01)，且呈剂量依赖性，其半数抑制浓度为 28．53 g／mL；(2)与化疗 药合用有增效作用 ：EL一3与顺铂合用能显著提高顺铂对 A549细胞 的核酸合成抑制率：EL一3低 、中、高剂量组．使 单用DDP的IR 由14．O1％分别提高到44．5％、48．96％和 67．05％P(0．O1)；IC50为20．62la,g／mL；EL一3与紫杉醇合用 能显著提高紫杉醇对 A549细胞的核酸合成抑制率 。EL一3低 、中、高剂量组使单用 TAX对 A549细胞 的 IR 由 21．79％，分别提高到 58-35％、66．13％和 73．67％，差异有统计学意义(f0．05)，IC50值为 7．41 mL；(3)EL一3能有 效地诱导A549细胞凋亡 ；(4)EL一3具有抑制裸 鼠移植瘤细胞 PCNA和 VEGF及 CD31蛋 白表达作用 结论 EL一3 抗肺癌 的作用机制是多靶点复合性的有 ：(1)抑制肺癌细胞核酸合成 ；(2)诱导肺癌细胞凋亡 ；(3)抑制癌灶的血管 生成和癌细胞对血管壁 的黏 附 [关键词]蛞蝓；蛞蝓提取物；肺癌细胞；凋亡：裸 鼠 [中图分类号)R285．5 [文献标识码]A [文章编号)doi：10．39690．issn．1674—070X．2011．07．002．006．05 Research ofEL-3 on anti-lung cancermechanism Xm Jin-kui，CAO Jian-guo，ZHANG An-qiang，WANG Juan (GuangzhouHanfangPharmaceuticaiCompanyLimited，Guangzhou，Guangdong，520240，China) [Abstract]objectiveToinvestigatethemechanism ofextractoflimax (EL一3)onanti— lung cancer．Methods fl1BrdU infiltrationmethodwasused to observe the inhibitingratesof EL一3 on thehuman lung cancerA549 cells． f21The morphologyofA549 cellsapoptosisilq． ducedbyEL一3wasdeterminedandcountedwith theacridineorange／ethidium bromidefAO／EB1 staining，and thec