补骨脂及其混伪品蛋白质电泳鉴别.pdfVIP

广东微量元素科学 2011年 GUANGDONGWEILIANGYUANSUKEXUE 第 l8卷第 7期 文章编号：1006～446X (2011)07—0050—04 补骨脂及其混伪品蛋 白质 电泳鉴别 李庚喜 朱 琪 曾 立 周效思 吕丽华 (邵阳医学高等专科学校药学系，湖南 邵阳 422000) 摘 要：为鉴别补骨脂与其混伪品，对两种种子的可溶性蛋白质进行了聚丙烯酰胺凝胶电泳分 析。结果表明，补骨脂及其混伪品的电泳图谱存在显著差异，电泳图谱可作为补骨脂及其混伪品 的鉴别依据。 关键词：补骨脂；曼陀罗子；电泳鉴别 中图分类号：R282．5 文献标识码：A 补骨脂 PsoraleacorylifoliaL．为豆科草本植物，常用中药，而曼陀罗子FructusseuSemen DaturaeMetelis系茄科植物，与补骨脂十分相似…，因此某些不法商贩将曼陀罗子与补骨脂混合 出售，然而曼陀罗子有毒，混用不仅给人们的健康带来危害，甚至威胁人们的生命安全，也给中 医药事业的发展带来了不利的影响。目前对补骨脂和曼陀罗子的鉴别手段主要是以最传统、最直 接的外观性状鉴别和显微鉴别方法进行，但这一鉴别手段在很大的程度上是依据经验鉴别，且药 材的外观性状和显微特征易受多种因素的影响，加上不法商贩在外观上加以伪装 ，可能会导致鉴 别结果的不准确。 中药质量控制是中药现代化生产和质量管理的重要组成部分。电泳是指带粒子在电场中向与 自身带相反电荷的电极移动的现象。它在蛋白质、多肽检测上具有广泛的运用价值，不同种类的 蛋白质可在电泳过程中形成不同的图谱带，从而达到鉴别区分的目的 。作者预先将补骨脂与 曼陀罗粉碎、过筛、提取有效成分进行相关性天然药物化学实验，结果证明补骨脂中含有黄酮和 蛋白质成分，曼陀罗子中含有生物碱和蛋白质成分，这些为蛋白质电泳实验提供了实验依据。本 文以 《中国药典》 (2005版)为指导，在普通鉴别的基础上，探索聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴别方 法，找出两种药材在电泳鉴别的图谱上的区别，拟建立一种稳定可靠的鉴别方法。 1 实验部分 1．1 试 剂 溴酚蓝(北京恒业中远化工有限公司)；丙烯酰胺 (国药集团化学有限公司)。 1．2 仪 器 DYY—m型稳压稳流电泳仪 (北京市六一仪器厂)；800型离心沉降器 (上海器械第十制造 厂)；DYY一Ⅲ型圆盘电泳槽(北京市六一仪器厂)；10～50 微量进样器(上海激光精密仪器厂)。 收稿 日期：2011—05—30 基金项 目：邵阳医学高等专科学校资助项 目(XK201004)；湖南省科技厅资助项 目(2008FJ3091) 作者简介 ：李庚喜(1984一)，男，助理实验师，学士，制药工程专业。 通讯作者：曾立(1978一)，男，讲师，硕士，主要从事药用植物活性成分研究。E—mail：zli86@yahoo．cn · 50 · 广东微量元素科学 20l1年 GUANGDONGWEILIANGYUANSUKEXUE 第 18卷第7期 1．3 样 品 曼陀罗子、补骨脂购 自邵阳中心大药房 。 1．4 试验方法 1．4．1 样品液的准备 将提取好的蛋白质溶液吸取2mL放入小烧杯。然后再向烧杯中加入等体 积的40％的蔗糖溶液和溴酚蓝示踪染料。 1．4．2 进 样 等胶管里的凝胶凝固以后，将凝胶管的封底去掉，放人圆盘电泳槽，套紧。电 极缓冲液加到圆盘电泳的上、下槽中，电极缓冲液面要淹盖过胶管口。然后用微量进样器将提取 液和配制好的蛋白质样品20 缓慢加到胶管的凝胶面上。 1．4．3 电 泳 将灌人蛋白质样品的凝胶管插入圆盘电泳槽中(上端 1／3，下端2／3)，记录好每 个胶管的编号及蛋 白质样品种类、位置。插好后，检查是否漏水，然后加入足量的电极缓冲液， 淹没凝胶管的顶部。电泳槽下部也要加入电极缓冲液，淹没电极。然后接通 电源，负极在上，正 极在下，电泳初期电压控制在 120—160V，待样品进入分离胶后，加大电压到 180～200V，继 续电泳，当溴酚蓝指示剂到达距凝胶管底部 1em处时停止电泳 ，关闭电源。 1．4．4 取 胶 整个取胶过