核酸酶P1酶解RNA工艺条件的优化.pdfVIP

中 国 调 味 品 2010年第 11期 CHINA coNDIIVlENT 试验研究 总第 35卷 核酸酶P1酶解 RNA工艺条件的优化 陈雪玉，莫晓燕 ，李黎 (iN安交通大学 生命科学与技术学院，西安 710O49) 摘要：采用桔青霉发酵生产核酸酶P1，分别探讨底物浓度、酶浓度、pH、酶解温度、酶解时间，以及二价 金属离子等因素对核酸酶 P1酶解酵母 RNA生产 5，-核苷酸效果的影响；在此基础上通过正交设计实验 优化酶解工艺条件。实验结果显示，六种金属离子中仅有 Zn。对核酸酶P1催化活性有明显促进作用； 核酸酶 P1酶解RNA的优化条件为：底物浓度 35g／L，反应初始 pH 5．6，酶浓度 8 ，反应温度75℃， 根据此条件酶解反应 8h，酶解效率与优化前比较提高155．6 。 关键词 ：核酸酶 P1；RNA；酶解条件 中图分类号 ：TS201．25 文献标识码：B 文章编号：1000--9973(2010)11--0055--04 OptimizationofRNA enzymolysisconditionsbynucleaseP1 CHEN Xue-yu，M O Xiao-yan ，LILi (SchoolofLifeScienceandTechnology，XianJiaotongUniversity，Xian710049，China) Abstract：NucleaseP1wasproducedbyPenicillium citrinum ，andthesinglefactortestsandorthogo— haldesignwereused tOoptimizeenzymolysisconditionsofyeastRNA such assubstrateconcentra— tion，enzymeconcentration，pH ，enzymolysistemperature，enzymolysistimeanddivalentmetalion． TheresultsshowedthatZn。 couldimprovetheenzymolysiseffectobviouslyamongthesixmetali— ons．Theoptimum enzymolysisconditionswereasfollows：35g／LRNA，pH 5．6，8 nucleaseP1， 75 ℃ enzymolysis8hours，and theenzymolysiseffectraised 155．6 comparedwith thatofbefore optim ization． KeyWords：NucleaseP1；RNA ；enzymolysiscondition 核酸酶 P1(NucleaseP1，EC3．1．30．1)是一种 由 分别探讨底物浓度、酶浓度、pH、酶解温度、酶解时间， 桔青霉 (Penicillium citrirum )发酵生成 的含锌金属 以及二价金属离子等单 因素对酶解效果 的影响；并且 酶 ，具有磷酸二酯酶的特性 ，可作用于核糖或脱氧核糖 通过正交设计实验优化酶解工艺条件 ，为酶法生产 5，一 分子中3碳原子上的羟基与磷酸之间形成的磷酸二酯 核苷酸提供参考依据 。 键[1]，生成5，-核苷酸或5，-脱氧核苷酸。其产品广泛用 1 材料与方法 于生物工程、医药、食品、化妆品、农业生产和科研等领 域，具有很高的经济价值[2]，尤其是呈味核苷酸在食品 1．1 材料与仪器 工业中的应用 日益增多。酶解法生产核苷酸有着广阔 核酸酶 P1由桔青霉 (AS3．2788，购于中科院微生 的应用前景 ，邵伟等[3]利用废酵母酶法提取核苷酸，为 物研