免疫组织化学技术的标准化质量控制.pdfVIP

山西医药杂志2010年11月第39卷第11期下半月 ShanxiMe ， !! !! ! !：!! ： !!兰!! · 实验技术 · 免疫组织化学技术的标准化质量控制 山西省人 民医院(030012) 赵丽平 杨莉珠 免疫组织化学是应用免疫学和组织化学原理 ，对组织 时间直到实验结果表达最好 。不能所有抗体都用一种修复 切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位 的定性 、定位 方法和都用一种缓冲液。碱性和中性的pH值效果都好时， 研究的一种技术。免疫组织化学是用标记物或显色物标记 在同等结果情况下应先首选 中性的缓冲液 ，因为碱性的缓冲 的抗体寻找组织细胞中的的抗原 ，来检测组织细胞 中化学 液容易脱片 。加热修复方法有微波和高压经实验证 明高压 成分从而达到诊断和研究疾病 的 目的。免疫组织化学实验 效果好 ，我们用高压修复当压力达到最大时计时 1．5min，迅 步骤多 ，影响因素复杂 ，因此免疫组织化学的质量控制显得 速降温直到能打开阀门自然冷却 。如 CDll7用柠檬酸高压 尤其重要。本文对免疫组织化学技术的标准化质量控制进 修复和乙二胺 四乙酸 (EDTA)微波修复获得 同样 的染色强 行 了探索 ，现介绍如下 。 度。酶消化时要根据组织来决定消化 时间，这必须做预实 1 标本 的固定 验。酶消化有胰酶、胃蛋 白酶，胃蛋 白酶更适合于胞质抗原 。 1．1 为 了使细胞和组织保持原有 的形态结构 ，防止组织 自 4 室内控制 溶 、抗原物质的抗原性不丢失。不同抗原其稳定性也不 同， 4．1 买来抗体就按厂家提供 的浓度用于临床是不安全 的： 因此固定是质控 的关键 。标本离体后要求在 15min内用 因为厂家提供 的浓度仅仅根据他 自己的实验室组织固定及 1O 甲醛 固定 ，时间为 12～24h，最好不要超过 72h。相 修复情况来拟定的抗体浓度 ，所以我们必须做预实验。抗体 对恒定的标本 固定时间是保证高质量免疫组织化学 的关 没有最佳的工作液、没有单一的抗体稀释度适合所有组织 。 键。因为组织 固定时间过长 ，切片 中容 易产生 甲醛色素颗 最好使用浓缩型抗体，一般在厂家提供的滴度前后各加一个 粒 ，影响结果观察及抗原不可逆性破坏无法修复而产生阴 滴度做预实验 。抗体 的最佳稀释度为在无背景染色的情况 性表达。组织 固定时问不足会造成抗原丢失 ，组织表面抗 下获得最强阳性信号 。如果这些滴度不是最适 ，要验证多个 原阳性表达而 中央为阴性表达。固定液 的种类很 多，不 同 稀释度。阴阳性组织 (最少各 1O例)直到敏感性和特异性达 的抗原和标本经过反复试验选用最佳固定液。 到最适。因为组织固定液及时间不同，抗体 的工作液只适合 l_2 固定组织 固定液 的用量为标本体积的 5～1O倍 。标 厂家实验室而对我们 的实验室并不完全适合 ，我们尽量不用 本过大时应切开 ，这样才能固定充分 。固定液的浓度过高、 工作液。新买的抗体要小剂量分装保存一20~C。避免反复 过低都会 因组织 固定差而导致抗原丢失或出现非特异性背 冻融或开启造成抗体效价降低或污染。每次更换抗体批号 景染色 。固定液应由制剂室统一配置这样才能保证 固定液 时都要进行验证 。用阴阳性对照，新旧批号用相同的抗体滴 的浓度 ，确保免疫组织化学结果的可靠信 。我院接诊 的下 度进行预实验。如结果和从前不一致应对新批号增加系列 级医院的会诊标本常常出现所有抗体全部阴性 。主要原因 滴度有利于进一步验证敏感性与特异性 。 是固定液 的浓度以及固定液种类不符合要求 。 4．