荷包猪SLA-2原核表达系的建立及表达研究.pdfVIP

2011年21(5) 生 物 技 术 45 荷包猪 SLA一2原核表达系的建立及表达研究 陈茜茜，王京华，张香春，宋硕，李鹏，高凤山 (大连大学生命科学与技术学院，辽宁 大连 116622) 摘要：目的：建立荷包猪 sLA一2原核表达系并研究SLA一2在 pET一32中的表达。方法：设计 sLA一2胞外区的表达引物， 亚克隆荷包猪 sLA一2的胞外区，并转化人原核表达系统 pET一32进行表达，SDS—PAGE分析其表达产物的特性。结果：PCR结 果显示，sLA一2胞外区亚克隆大小为840bp，酶切鉴定证实成功插入pET一32表达载体 ，构建重组质粒 pET一32a(+)／SLA一2。 SDS—PAGE显示，sLA一2基因导人宿主菌后成功表达，蛋白大小为51．4ku，与预期结果相符 ，蛋 白相对表达含量达到了45％。 结论：结果表明荷包猪SLA一2在pET一32系统中成功表达 ，蛋白表达量符合要求 ，可用于下一步的结构和功能检测。 关键词：荷包猪 ；SLA一2；原核表达系 中图分类号：Q786 文献标识码：A doi：10．3969／j．issn．1004—311X．2011．05．123 Construction ofSLA ——2ProkaryoticExpressingSystem ofHeBaoPigandStudyon ItsExpression CHEN Xi—xi，WANGJing—hua，ZHANGXiang—chun，SONGshuo，LIPeng，GAOFeng—shan (CollegeofLifeScienceandTechnology，DalianUniversity，Dalian116622，China) Abstract：Objective：ToconstructtheSLA一2ProkaryoticExpressingSystemofHeBaoPig，andstudyontheexpressionofSLA一2in pET一32．Method：A pairprimertoexpresstheextrocellulardomainofSLA一2wasdesignedandtheextrocellulardomainofSLA 一2was sub—clonedintopET一32followedbytransformingintoEscherichiacoliBL21(DE3)andthenanalysisofthecharacterofexpressing productsbySDS—PAGE．Result：ThePCRresultswereshownthatthelengthofnucleotidesinextracellulardomainofSLA一2wasabout 840bpwhichwasconsistentwiththecalculatedvalue．Inaddition，theSLA 一2wasprovedtobeinsertedintothepET一32bycleavage withEcoRVandXhoIandtheconsturctedexpressingvectorwasnamedaspET一32a(+)／SLA一2．BySDS—PAGE，SLA一2was successfullyexpressedinEscherichiacoliBI221(DE3)andtheinterestofproteinwasabout51．4kuwiththe45percentofrelativeex· pressedcontentofrecombinantSLA 一2proteinConclusion：liwasconcludedthattheSLA一2hadbeenexpressedinpET一32Prokaryot- icExpressingSystem andthecontentofexpressedproteinsatisfiedtotheneed，whichwouldbeusedtostudystructureandfunctionofSLA 一 2． Keywo