利用CTAB法从刺梨中提取核酸的效果分析.pdfVIP

山地 农业 生物 学报 28(1)：79～82，2009 Journal of Mountain Agriculture and Biology · 简 报 · 利用 CTAB法从刺梨 中提取核酸的效果分析木 刘 明，安华明，杨 玉 (贵州大学 喀斯特山地果树资源研究所，贵州 贵阳 550025) ‘关键词：刺梨；核酸；CTAB；CTAB—LiC1；提取方法 中图分类号：$611．9 文献标识码：A 文章编号：1008—0457(2009)01—0079—04 An efficientmethodforDNA andRNA extractionfrom Rosaroxburghiifruitsandleaves L／UMing，AN Hua—ming，YANG Yu(ResearchInstituteforFruitResourcesofKarstMountainRegion，Guizhou University，GuiyangGu~hou550025，China) Keywords：RosaroxburghiiTratt；Nucleicacid；CTAB；CTAB—LiC1；Extractionmethod 高质量 DNA和RNA的获得是进行分子标记、基因克隆、分子杂交等分子生物学实验的基础。从植物 组织中提取核酸的方法较多，针对不同植物主要有 SDS法、CTAB法、异硫氰酸胍法等 。刺梨作为原产 于我国的一种新兴果树，近年来对其种质遗传多样性及特殊、珍稀性状的分子生物学研究逐渐受到重视。 但由于刺梨果实、叶片等组织内含有丰富的单宁、酚类、色素及多糖等物质 j，核酸通常难以分离，极大地 制约了研究工作的开展。 本研究采用CTAB法口提取刺梨基因组DNA进行电泳、限制性内切酶酶切等检测，对该法的提取效 果进行评价。同时，在对CTAB—LiC1法-4进行适当改 良的基础上，建立和完善了刺梨总RNA提取的有 效方法，并对所获得的RNA样品进行电泳、RT—PCR等检测，分析其提取效果，为刺梨相关基因工程和分 子生物学研究提供技术参考。 1 材料与方法 1．1 材料 1．1．1 试材 试验材料为 3年生贵农五号刺梨(RosaroxburghiiTrattcv．Guinong5)优 良无性系，种植于 贵州大学园艺系刺梨种质资源圃。所采刺梨果实和叶片样品均用液氮速冻后保存于一70~C备用。 1．1．2 试剂 CTAB／NaC1(10％CTAB，0．7mol·L-NaC1)；CTAB抽提液 (2％ CTAB，0．1mol·L-Tris， 20inmol·L-EDTA，1．4otol·L-NaCI，pH8．0)；TE／NaC1(10mmol· Tris，0．1mmol·L-EDTA，1mol·L- NaCI，pH值8．0)；提取缓冲液[2％CTAB，2％PVP，0．1otol·L-Tris—HC1(pH值8．0)，25mmol·L-ED— TA(pH值8．0)，2．0mol·L-NaCI，0．5g·L-亚精胺，2％ B一巯基乙醇]；SSTE[1．0mol·L-NaC1，0．5％ SDS，10mmol·L-Tris—HCI(pH值 8．0)，1mmol·L-EDTA (pH值8．0)]；1×TAE(40mmol·L-Tris， 2mmol·L-EDTANa2·H2O，20mmol·L-冰乙酸)。 收稿 日期：2008—11—03；修 回日期：2008—11—18 基金项 目：贵州省 自然科学基金 ；贵州省教育厅 自然科学基金；贵州大学人才基金。 作者简介：刘 明(1983一)，男，陕西西安人，在读硕士研究生，研究方向为生物技术与果树遗传育种。 80 山地 农 业 生 物 学 报 2009年 1．2 方法 1．2．1 基因组DNA提取 取0．5～2．0g样品并加入少量不溶性的PVP，在液氮中研磨成粉未；取8mL CTAB抽提液，加入 160ixLI3一巯基乙醇，混匀，预热至65~C；将粉未倒人 CTAB抽提液中混匀，65％保温 1h(每隔10min摇匀 1次后；加人等体积氯仿 ／异戊醇(2