香蕉NBS—LRR类抗病基因同源序列的克隆与分析.pdfVIP

中回磨擘c童撮 2009，25(05)：271-274 ChineseAgriculturalScienceBulletin 香蕉NBS—LRR类抗病基因同源序列的克隆与分析 袁克华 ，冯仁军 ，程 萍 ，张银东 (。海南大学，海口570228；中国热带农业科学院热带生物技术研究所，海口571101) 摘 要：根据 已知植物抗病基因的保守区域设计引物，从香蕉基因组DNA扩增出一条与植物抗病基因同 源的序列，命名为BRGA1，该同源片段含有典型的NBS—LRR类抗病基因所拥有的保守性结构P．1oop、 Kinase．2a、Kinase一3a和疏水结构域HD，它与部分 已知NBS．LRR类抗病基因的氨基酸序列同源性为 23．8％~42．7％。Northern杂交表明BRGA1在香蕉中受水杨酸调控，属诱导型表达。 关键词 ：香蕉NBS—LI ；同源克隆技术；抗病基因同源序列；水杨酸 中图分类号：$59 文献标识码：A CloningandIdentificationoftheResistanceGeneAnalogsofBanana YuanKehua ，FengRenjun ，ChengPing ，ZhangYindong。 (CollegeofAgronomy,HainanUniversity，Haikou570228；~InstituteofTropicalBioscieneeandBiotechnology, ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences，Haikou571101) Abstract：Specificprimersequencesweredesignedonthebasisofconversemotifsof clonedresistancegenes andsubsequentlyusedasPCRprimerstoamplifytheresistancegeneanalog(RGA)inbanana．Theamplified productofBRGA1wasclonednadsequenced．ThebannaaRGA contain someconserved motifssuchas p-loop，Kinase-2a，Kinase-3aandHDpresentinginknownNBS-LRRresistancegenesfrom otherplantsnad sharebetween23．8％一42．7％ aminoacidsequenceidentitywiththem．TheBRGA1expressionwasinduced anddetectedbyNorthern blotting，whichispositivelyregulatedbysalicylicacid． Keywords：bananaNBS-LRR，homology-basedcloning，resistnacegenenaalog(RGA)，salicylicacid 抗病基因的分离对作物抗病机制的理解及抗病育 如P—loop、Kinase．2a、Kinase．3a和跨膜 结构域 GLPL 种具有重要意义。迄今为止，已经克隆了5O多个抗病 等，NBS结构域能够结合ATP或GTP，可能参与了抗 基因，它们大多是利用图位克隆技术和转座子标签技 病信号的传递，在植物抗病反映中起重要作用。目前 术获得的，如烟草的N基因 】、亚麻的L6基因[21、拟南芥 已从水稻、大豆、野生稻等植物材料中分离了大量的 RPS2基因[31、水稻的Xa21基因[41、Xal基因C5]、小麦的 NBS类RGAs，并进一步开展了分子标记、定位、功能 Lr21基因 】、Lrl0基因7[1等。这两种技术适用于基因组 分析等多方面的研究 【“1。 较小的植物，但对于基因组复杂的香蕉等植物则相当 最