小鼠睾丸hsc70t基因的克隆与序列分析.pdfVIP

中国磨爹通提 2009，25(04)：14—17 ChineseAgriculturalScienceBulletin 小鼠睾丸hsc70t基因的克隆与序列分析 侯春霞，姜忠玲，田文儒 (青岛农业大学动物科技学院，山东青岛266109) 摘 要：为了获得小鼠睾丸hsc70t基因的开放阅读框，根据GenBank中已发表的hsc70t的基因序列设计 了特异性引物(GenBankaccessionNo：NM 013558)，提取睾丸中的总DNA，利用PCR方法扩增hsc70t 基因序列，连接到pMD18．T载体上，然后进行序列测定与序列分析。测序结果表明PCR扩增得到一条 1926bp左右的基因片段。所测序列被GenBank收录，收录号为EU549780，与GenBank上公布的小鼠 hsc70t基 因序列 同源性达99．9％，与大鼠(Rattusnorvegicus)、猕猴 (Macacamulatta)、黑猩猩 (Pan troglodytes)、蟾蜍(Xenopus)、人类(Homo)和青锵 (Oryziaslatipes)的相似性分别为94．4％、85．4％、84．9％、 72．7％、71．9％、67．1％；进化树构建结果表明小鼠与大鼠距离最近。证实了hsp70基因的高度保守性，并 为hsc70t的进一步研究和应用奠定了基础。 关键词：小鼠睾丸；hsc70t基因；同源性 中图分类号：$865．1+3 文献标识码：A CloneandSequenceAnalysisofhsc70tGeneinM ouseTestis HouChunxia，JiangZhongling，TianWenm (CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine,QingdaoAgriculturalUniversity,QingdaoShandong266109) Abstract：Toobtaintheopenreadingframe(ORF)ofhsc70tgeneinmousetestis，thespecificprimerswere designedaccordingtohsc70tgeneorderpublishedinGenBank(GenBankaccessionNo：NM_ 013558)，The totalDNA wasextractedfrom mousetestis，Thehsc70tgenewasamplifiedbyPCR from totalDNA，and connectioned topMD18-T vector，then sequencingand analysiswereaccomplished．Sequencingresult showedthesequencecontained1926bpWaSobtainedbyPCR ma plification．ThesequenceWas embodiedby GenBank，theGenbankaccessionnumberisEU549780，Thesimilarityofnucleotideseuqencewas99．9％ approximatelybetween theclonedgeneandthemousetestishsc70tgeneinGenbank，Comparisonofthe nucleotidesequencebetweenmouseandtheRattusnorvegicus，theMacacamulatta，thePantroglodytes，the Xenopus，theHomo，theOryz／aslatipesbyDNA Star，showssimilarityscorewere94．4％ 、85．4％ 、84．9％ 、 72．7％ 、71．9％、67．1％．Phylogeneticanalysisshowedmousehadtheclosestgeneticrelationshipwithrattus norvegicus．Theresuhsconfirmed