椰子ISSR体系优化.pdfVIP

中圊患学通报 2009，25(04)：24-29 ChineseAgriculturalScienceBulletin 椰子ISSR体系优化 潘 坤 ，王文泉 ，吴 翼 ，唐龙祥 (中国热带农业科学院椰子研究所，海南文昌571339~ 中国热带农业科学院热带生物技术研究所，海南海 口571101) 摘 要：该实验 旨在获得最佳的椰子ISSR—PCR反应体系，以海南本地高种和马来亚高种为实验材料 ，采 用单因素实验法将反应体系的5个主要因素设定5个梯度，根据每个因素量的变化对扩增结果产生的影 响进行 了研究；并利用梯度PCR仪得 出引物807的最适退火温度为56．0℃；最后确定最佳反应体 系为： 总体积20 l，Taq聚合酶1．0U、M 浓度即lOxTaqBuffer用量2．5mmol／L、模板DNA用量50ng、dNTPs 浓度O．2mrnol／L、引物浓度0．8lmaol／L。 关键词：椰子；ISSR；体系优化 中图分类号：$667．4 文献标识码：B OptimD~ationofISSR-PCRSysteminCoconut(CocosnuciferaL．) PanKun，WangWenquan，WuYi，TangL0ngxjang (~CoconutResearchInstituteofChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences，WenchangHainan571339； 2InstituteofTropicalBioscienceandBiotechnologyofChineseAcademyofTropcial AgriculturalSciences，HaikouHainan571101) Abstract：ForoptimizingISSR-PCR reactionsystem ofcoconut，wedistilledthetotalDNA oftwococonut euhivars．HainanTallandMalayan 附 linthesinglefactorexperimentincludedfivefactorstofivedifferent concentrations，andthentheeffectofvariationsoftheseconcentrationswerestudied．Menawhile，weobtained theoptimalannealingtemperatureofprimer807was56 ℃ ．Inconclusion．thecoconutreactionsystem was optimizedasbelow：0．5—2。0UTaqDNApolymerse，2．5—3．0mmol／L10xTaqBuffer(25mmol／LMe)，50ng templateDNA，0．2-0．5mmol／LdNTPsand0．8-1．6Ixmol／Lprimerwithtotal20 lreactionsolution． Keywords：coconut，ISSR，system optimization 椰子(Cocos．uciferaL．)是热带地区主要的木本油 销售收入约3亿元人民币，其相关产业收入约50亿 料作物之一，全世界有90多个国家和地区种植。椰子 元。椰子在 自然进化和人工栽培驯化形成了许多变 周年均可产果，但产果高峰期9月至次年 1月，经济寿 种、品种和类型，目前在中国其命名是以其形态特征 命长达80年 1。在中国，椰子的栽培历史已经有2000 或引进国家名称为依据，又由于其种质资源 的丰富 多年，其规模种植主要在海南省 ，云南、广东、广西、 性，遗传背景的复杂性，因此造成了一定程度上的命 福建和台湾南部也有少量种植，目前海南的种植面积