黄颡鱼促黄体激素受体基因克隆及在雌鱼繁殖周期中的表达.pdfVIP

第35卷第 l2期 水 产 学 报 VO1．35．No．12 2011年 12月 JOURNAL OF FlSHERIESOFCHINA Dec．．2011 文章编号 ：1000—0615(2011)12—1770—10 DOI：10．3724／SP．J．1231．2011．17631 黄颡鱼促黄体激素受体基 因克隆及 在雌鱼繁殖周期中的表达 刘 淼 ，温海深 孙，何 峰 ，李吉方 ，马瑞芹 ， 胡 健 ，母伟杰 ， 张远青 ，祁保霞 (1．中国海洋大学水产学院，山东 青岛 266003； 2．内蒙古民族大学动物科学技术学院，内蒙古 通辽 028000) 摘要：通过简并引物扩增及SmartⅢRace技术，首次克隆了黄颡鱼促黄体激素受体 (LHR) 基因cDNA 全长序列。该基 因全长 2524bp，编码 701aa，含有属 于糖蛋 白激素 受体 (GpHR)家族 的典 型跨膜螺旋 结构 区域 (TM helix)。9个 富含 亮氨酸 的重复性序 列 (LRRs)；4个潜在 的N一端糖基化位点：29NFTC，船NVSR，∞NGSR，。NLTV；24个 Ser，6个 Thr和5个 Tyr磷酸化位点。同时 ”S为潜在 的PKC位点。通过 RT—PCR分析组织表达 ， 卵巢繁殖周期中卵巢和脑的表达水平并结合血浆中E。含量的变化，发现LHR在卵巢 中大 量表达，其次是脑、肾脏、心脏、肝脏和肠存在少量或微量的表达；在卵巢繁殖周期中，卵巢LHR 表达从Ⅲ期一V期处于较高水平，V期达到最高峰，随后下降到最低值；而脑的表达高峰出现 在Ⅳ期，与血浆中E。变化相一致。推测卵巢和脑 中LHR基因参与卵黄的生成，调控卵母细胞 的成熟和排卵。 关键词：黄颡鱼；促黄体激素受体；基因克隆；半定量mRNA表达 中图分类号：S917．4；Q785；Q786 文献标志码 ：A 与脊椎动物相似，硬骨鱼类的生殖周期受 (glycoproteinhormonereceptor，GpHR)亚 家 脑一垂体一性腺轴调控。而垂体是通过分泌促卵 族 ，其家族成员具有一个典型的N一末端胞外区 泡激素(follicle—stimulatinghormone，FSH)和促黄 域 (extracellulardomain，ECD)，由7个跨膜螺 体激素 (1uteinizinghomrone，LH)参与诱导配子发 旋区 (transmembranehelix，TM helix)构成的锚 育和性腺类固醇激素的生成 I2。其中，LH在鱼 定单元 (anchoringunit)和一段细胞 内c一末端 类中也被称为促性腺激素 1I(gonadotropinII，Gt (C-terminaldomain)G蛋 白偶联区域 。激素通 HI1)，主要功能是促进卵泡的成熟和排卵，刺激 过与受体的结合 ，诱导受体构象从不活跃到活 卵泡内膜细胞产生雌激素 ，通过能与 LH相结 跃的转变 ，引起跨膜区 (TMD)重新排列，激活 合 的促 黄 体 激 素 受 体 (1uteinizing hormone G蛋 白偶联通路 。N一末端胞外 区域 (ECD)是 receptor，LHR)对性腺组织的介导，实现其生理 激素识别和高度结合区，包括富含亮氨酸的重 功能 ]。 复性 区域 (1eucine—richrepeats，LRRs)，其 中含 促黄体激素受体 (LHR)属于 G一蛋 白偶联 有半胱氨酸高度保守区。7个跨膜螺旋区(TM 受体 (Gprotein—coupledreceptor，GPCR)超家 helix)由3个包 内环 (intracellularloop，IL