板栗的分子标记及育种研究概况.pdfVIP

维普资讯 落叶果树 DECIDUOUS FRUITS 2005(3) 板栗的分子标记及育种研究概况 苑克俊。刘庆忠 (山东省果树研究所，泰安271000) 摘 要：概述了板栗的DNA提取方法、RAPD反应技术体系、遗传多样性和品种鉴定、栗疫病与分子标记 育种等方面的研究进展，指出今后在板栗研究中应学习其他植物上的标记新技术，注意开发SCAR、AFLP、 SSR、CAPS以及新型的SNP等分子标记技术。 关键词：板栗；DNA；分子标记；RAPD；育种 中图分类号：s664．2 文献标识码：B 文章编号：1002—2910(2005)03—0013—03 板栗栽培历史悠久，资源丰富。近年来，在 项艳 等通过对几种提取方法获得的板 板栗的遗传多样性分析、品种鉴别等方面已逐 栗基因组DNA质量分析认为，提取液中加入酚 步应用了分子生物学技术，开展了分子标记与 结合剂可溶性聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpyrro— 分子标记育种等方面的研究工作。 lidone，PVP)的改良SDS法是最理想的提取方 1DNA的提取 法，能满足RAPD及其他分子生物学研究的需 提取DNA是进行分子生物学研究的基础。 要 。他们用高盐低pH值法所获得的DNA 植物幼嫩组织中DNA含量高，次生物质少，故 浓度为255g／mL，其A∞／A。值为1．65，纯度 一 般选取植物的嫩叶提取DNA。由于板栗营 不高；用 CTAB法所获得的 DNA浓度为 养组织中酚类化合物和单宁等次生物质含量 235g／mL，其A26o／A280值为2．11；用Cuidet微 高，DNA的提取和纯化非常困难¨。沈永宝等 量制备DNA法所获得的DNA浓度为 108x／g／ 研究表明，用CTAB法提取板栗冬芽、嫩叶、半 mL，其A∞／A80值为2．13；用氯仿一异戊醇一 木质化韧皮部和老枝韧皮部的DNA时加6％B 核糖核酸酶法所获得的DNA浓度为93g／mL， 一 巯基乙醇可较容易地提取，且DNA的纯度较 其A∞／A80值为1．38；用改良SDS法所获得的 高，其A∞／A∞值高于1．8，可满足分子标记实 DNA浓度高达918g／mL，DNA产率、122．41~g,／ 验的要求；对于成熟叶片，则DNA的纯度较低， g，其A26o／A280：1．941．8，效果较理想。他们 且带有褐色。但经过两次酚抽提后，A∞／A。 认为，通过调节提取液的渗透势，使之与细胞核 值也能达到1．7以上 J。他们认为，板栗叶片 内的渗透势保持平衡，可防止细胞核破裂。细 中含酚量高，保温时极易氧化，是导致提取 胞核裂解前，在提取液中加入2％PVP可将细 DNA失败的主要原因，必须在提取液中加大抗 胞质中的酚类等杂质与细胞核分开、排除污染。 氧化的B一巯基乙醇的用量。用CTAB和SDS 加入2．5％B一巯基乙醇的提取介质，可有效防 法提取DNA的效果差别不大。 止氧化褐变，所提取的DNA絮状沉淀颜色最 收稿 日期：2004—12—30 作者简介：苑克俊(1963一)，男，山东莒县人，博士，研究员，从事果品贮藏和分子标记定位基因研究工作。 13 维普资讯 白、最易溶解。翁尧富等的研究也表明，在 以花序、总苞和果实的形态等性状为主要依据。 CTAB法的提取液中加入1％PVP效果理想 ]。 这种方法既难以准确鉴别一些形态相近的品 综上所述，对于含酚类物质较高的板栗组 种，也难以在早期准确地鉴定品种。生产上迫 织，采用CTAB或SDS法提取DNA时，宜加大 切需要一种准确鉴别品种的新方法，并且对新 抗氧化的B一巯基乙醇用量或加入1％一2％的 品种的审定、注册、保护和管理，也需要有准确、 PVP。同时加入2％PVP和2．5％B一巯基乙醇 可靠地区分品种特异性的检测方法。 能有效抑制多酚类物质