NA-1株鹅源副粘病毒M、F和HN蛋白基因的真核表达.pdfVIP

维普资讯 · 90 · 中国生物制品学杂志2OO8年 2月第 2l卷第2期 ChinJBiologicalsFeburary2OO8，Vo1．21 No．2 中国图书分类号 鼹鼹．33$852．659．5 786 文献标识码 A 文章编号 1oo4-5．~(2u)Q2-Q090．04 【a妄石出研究】 NA．1株鹅源副粘病毒 M、F和 I-IN蛋 白基因的真核表达 马爱霞。袁洁 丁壮。 宣华。宋子运。徐明。 【摘要 】 目的 获得鹅源副粘病毒(GPMV)NA-I株lVl、F和HN基因真核表达蛋白。方法 将NA-I株GPNV经SPF鸡胚 增殖 、纯化，提取病毒基因组 RNA。参考 GenBank登录的NA-I株GPMV基因组序列，设计3对特异性引物，利用 RT-PCR法，分 别扩增 lVl、F和HN基因开放阅读框 (OfF)，将 目的基因克隆至pNDI8．T-Simple载体，并进行酶切和序列测定。将 目的片段克隆 至pCI．ileO表达载体，酶切鉴定正确的重组质粒 ，分别命名为ocI-m、pC~-F和pcI-I 。将重组表达质粒分别转染 Veto细胞，用 间接免疫荧光试验鉴定目的蛋白的表达。结果 RT-PCR法分别扩增出M、F和 HN基因，大小与预期一致。克隆载体及表达 载体酶切及测序鉴定正确；重组真核表达质粒转染Veto细胞后，荧光显微镜下可见特异性荧光。结论 利用pCI．ileO真核表 达载体在Veto细胞中成功表达了NA-I株 GPNVlVl、F和 HN基因，为下一步研究该病毒的出芽机制以及各结构蛋白的功能奠 定了基础。 【关键词】 鹅源副粘病毒；NA-I株；lVl基因；F基因；HN基因；真核表达 EukaryoticExpressionofM ，FandI-IN GenesofGooseParamyxovirusNA-1Strain NAAi-】i【a ，ⅥJANJie，DINGZhuang，etal(Departmentof 吗 PathogenandDi,seo,$einAnimals，NationalICy LaboratoryofPreventiveVeterinaryMedicine，JilinUnivers~ ，Changchun130062，Chn／a) A【l~a-act】Objective Toexpr~slVl，Fand genesofgooseparamyxovirus(GPNV)NA-Istrainineukaryotiecells．Methods TheNA·l8tl~linofGPMVlqlt~,．proliferatedinSPFchickembryocellsandpurifiedforexlxa,etionofg~,lonlicRNA．Design3pairsofspecific primersaccordingtothesequenceofgenomeofGPMVNA-IstrainreportedinGenBankfortunpli~ealionofopenreadingframe(off)oflVl， FandHNgenesbyRT-PCR．InserttheamplifiedtargetgenesintopND l8-TSimplevectorandidentifytheconstructedrecombinantplasmidby restrictionanalysisandsequencing．Clonethet~ecoveredtargetgenef]agmenttoexpressionvectorpC]·ileOandSclrlBenthecorrectlyconstructed recombinantplasmidsbyrestriction~ lysis，whichwerenamedaspO-m ，pC]·FandpC]·HN respectively．TransfectVetocellswiththecon- struetedrecombinantplasmidsandidentifytheexpressedproductbyindii~ectIFA．Results ThekI1gtI1sofamplifiedlVl，FandHN genesw眦 consistentwiththoseexpected．Restiction