白芷多糖的提取纯化及其对仓鼠肺细胞生长作用的研究.pdfVIP

维普资讯 · 172 · 山东中医杂志2005年 3月第 24卷第 3期 白芷多糖的提取纯化及其对仓鼠肺细胞生长作用的研究 曲见松 ，康学军 ，王林波。 (1．东南大学 公共卫生学院，江苏 南京210009；2．上海市药品检验所，上海200233) [摘要]目的：研究白芷多糖(ADP)的提取纯化及其对中国仓 鼠肺细胞(CHL)生长作用的影响。方法：提取 ADP，经SephadexG-5O、G-200层析纯化，用二甲基噻唑二苯基四唑溴盐(MTT)比色法检测 ADP对体外培养的 CHL细胞生长增殖的作用。结果：经SephadexG-5O、G-200层析纯化后，分子量范围为 1000～200000的ADP在 5O、100、500~g／ml对CHI细胞的生长增殖均有促进作用。结论 ：ADP对体外培养的CHL细胞增殖具有促进作 用。 [关键词]杭 白芷；白芷多糖；层析纯化；CHL细胞；MTT比色法 [中图分类号]R282．710．5 [文献标识码]B [文章编号]0257—358X(2005)03—017203 白芷 (RadixAngelicadahurica)性味辛、温， 3000r／min离心 10min，取上清液。上清液减压浓 归胃、大肠、肺经，具有散风除湿、通窍止痛、消肿排 缩至原体积的 1／5，Sevag法除蛋 白后加入无水 乙 脓之功效。临床用于治疗各种溃疡性疾病、肺部疾 醇，使溶液中乙醇的浓度达到70 ，4℃静置 48h， 病的方剂中，白芷都较为常用。目前对 白芷的研究 取沉淀物，加水复溶，减压浓缩，冷冻干燥得灰白色 多集中在其所含有的香豆素和挥发油上口 ]，而对 白芷粗多糖。 白芷 中含量丰富的白芷多糖 (Angelicadahurica 1．3-2 白芷粗多糖的纯化 取白芷粗多糖，加水超 polysaccharides，ADP)却研究甚少。从 目前仅有的 声溶解。水做洗脱剂，经SephadexG一5O柱层析 (6O 文献来看，ADP能增强实验动物皮肤细胞的免疫功 cm×1cm)，调节流速 5滴 ／min，每管收集 4ml，硫 能 ]，而对体外培养细胞生长作用的研究还未见报 酸一苯酚法检测。合并最大吸光度管的多糖溶液，冷 道。本研究采用细胞体外培养法，探讨 了ADP对 冻干燥。干燥品加水溶解，再经 SephadexG一200柱 中国仓鼠肺细胞 (CHL)生长增殖的情况。 层析纯化，收集洗脱液，硫酸一苯酚检测。合并最大 1 材料与方法 吸光度管的多糖溶液，冷冻干燥得到所要的ADP 1．1 仪器与材料 旋转蒸发器(上海青浦沪系仪器 样品。 厂 RE一852)；冷冻干燥仪 (丹麦 Heto)；细胞培养箱 1．3．3 样品配制 用 RPMI一1640培养液溶解纯化 (法国JOUAN)；倒置显微镜 (日本 oLYMPUS)； 后的ADP样品，配成 5O、100、500t~g／ml的多糖溶 酶标仪 (日本 BIO—RAD)；SephadexG一5O、G一200(美 液，一次性滤器过滤除菌。 国Pharmacia)；96孔细胞培养板(美国CoSTAR)。 1．3．4 细胞实验 以0．25 的胰酶消化处于对数 1．2 试剂与药品 CHL细胞株(中科院上海细胞 生长期的CHL细胞，培养液调节细胞密度到 5× 所)；RPMI一1640培养基 (美国 GIBCO)；新生小牛 10个 ／ml，加入到 96孔细胞培养板 中，每孔 100 血清(杭州四季青生物工程公司)；胰蛋 白酶 (美国 l，37℃细胞培养箱中培养 24h，使细胞贴壁生长。 AMRESCo)；MTT(美国AMRESCO)；杭 白芷。 吸出原液，将细胞分成空白组和对照组，空白组加入 1．3 实验方法 RPMI一1640培养液，样品组加入不同浓度的ADP 1．3．1 白芷粗多糖的提取 取杭 白芷 100g，碾成 培养液，每孔均为200 l。培养 48h。吸出原液，加 粉末，石油醚回流提取 4h，无