二硫键稳定的抗氯霉素单链抗体的构建.pdfVIP

※生物工程 良 晶 科 学 201Vo1．31，No．21 271 二硫键稳定的抗氯霉素单链抗体的构建 李黄金，陈 伟，赵 林 ，柴伟佳，唐 伟 (广东药学院生命科学与生物制药学院，广东 广州 510006) 摘 要 ：为构建一种食品残留检测用二硫键稳定的抗氯霉素单链抗体 (sdsFvcAo)。以抗氯霉素抗体可变区基因为模板， 通过引物突变PCR在轻链和重链的可变区分别引入一个半胱氨酸定点突变，以重叠延伸PCR组装成 sdsFvcAv。在 大肠杆菌系统强启动子T7驱动下，sdsFvc 基因不能单独表达，而通过同义突变降低其5端序列GC含量则可实 现高效表达。表达产物主要以包涵体形式存在，经 一环糊精分子伴侣系统复性可获得亲和力与母本抗体相似的 sdsFvcr。所构建的sdsFvcr具有取代单克隆抗体用于氯霉素残留检测的潜力。 关键词 ：氯霉素；二硫键稳定的单链抗体；高效表达； 一环糊精分子伴侣 ；复性 ConstructionofDisulfide—StablizedSingleChainVariableFragmentDirectedagainstChloramphenicol LIHuang-jin，CHENWei，ZHAOLin，CHAIWei-jia，TANGWei (CollegeofLifeScienceandBiopharmaceuticals，GunagdongPharmaceuticalsUmve~iyt，Gunagzhou 510006，China) Abstract：Toconstructadisulfide—stablizedsinglechainvariablefragmentdirectedagainstchloramphenicol(sdsFvc~)，both clonedVgeneswereintroducedacystinecodebysite-specificmutagenesis，thenassembledintosdsFvc~genebyoverlapextension PCR．UndertheconrtolofstrongpromoterT7，thesdsFvc~ genewasfailedtobeindividuallyexpressedinEscherichiacoli，but over-expressedasinclusionwhenGCcontentintheterminal5sequencewasdecreasedbysynonymousmutation．Theinclusion proteinwasrefoldedwiht 一cyclodextrincompanionsystem ，andshowedaffinitysimilartoitspraentmonoclonal antibody (MAb)．Th esdsFvcAPpreparedinhtisstudycouldbepotentiallyusde insteadofconventionalnatiseraorMAbfordevelopment ofarapidandaffordableimmunoassayforthedetectionofresidualCAPinfoods． Keywords：chloramphenicol；disulfide—stablizedsinglechainvariablefragment；over·expression； 一cyclodextrin companion；renaturation 中图分类号：Q81 文献标识码：A 文章编号：1002．6630(2010)21—0271—04 氯霉素(chloramphenicol，CAP)是一种可引起人类 区的小分子基因工程抗体，该类抗体既保留了母本抗体 再生障碍性贫血粒状 白细胞缺乏症等严重疾病的抗生 的亲和力又便于基因工程手段生产，故得到了较广泛的 素，白1994年起便被联合国禁止使用，我国亦 自2002