高山红景天中糖基转移酶家族cDNA全长基因的克隆.pdfVIP

244 2010,Vo1．31，No．21 良 品 科 孛 ※生物工程 高山红景天中糖基转移酶家族cDNA 全长基因的克隆 于寒松 1，张继星2，李彦舫3，马兰青 一，胡耀辉 1， (1．吉林农业大学食品科学与1二程学院，吉林 长春 130118；2．内蒙古民族大学生命科学学院，内蒙古通辽 028043 3．吉林大学植物科学学院，吉林 长春 130062；4．农业部都市农业(北方)重点开放实验室，北京农学院，北京 102206) 摘 要：为了获得高山红景天中红景天苷生物合成关键酶——UDP一糖基转移酶家族摹因的全长cDNA序列，采用 在线简并引物设计软件结合3一RACE技术获得两个糖基转移酶基因的3端部分序列，进一步采用不同的5．RACE 试剂盒扩增两个基因的5端序列，结果显示利用Takara公司的试剂盒扩增可以得到eDNA全长序YU(C,enBank登录号 为EF508689和EU567325)，而采用 Invitrogen公司的试剂盒得到的序列小包括伞部开放读码框。实验证明，利用 Takara公司的SMARTef RACEeDNAAmplificationKit克隆获得基冈全长序列的比率更高。 关键词：糖基转移酶；基因克隆；eDNA末端快速克隆法(RACE)；高山红景天 Full—lengthcDNA CloningofGlycosyltransferaseFamilyfrom Rhodiolasachalinensis YU Han—song ，ZHANG Ji—xing ，LIYan—fang ，M A Lan—qing ，，HU Yao—hui， (1．CollegeofFoodScienceandEngineering，JilinAgriculturalUniversity，Changchun 130118，China； 2．CollegeofLifeSciences，InnerMongoliaUniversiytfortheNationalities，Tongliao 028043，China； 3．CollegeofPlantScience，JilinUniversiyt，Chnagchun 130062，China； 4．KeyLaboratoryofUrbanAgriculture(North)，MinistryofAgriculture，BeijingUniversityofAgriculture，Beijing 102206，China) Abstract：InOrdertoobtainthecriticalenzymeofrthesynthesisofRhodiolasachalinensisglycoside，twoputativeUDP- glycosyltransferase(UGT)cDNAs(GenBankaccessionnumber，EF508689和EU567325)wereisolatedfrom足sachalinensi． Theprimersweredesignedofr3 一rapidamplificationofeDNAends(RACE)basedonhteconsensushybridoligonucleotide primers(CODEHOP)s~ategybytheBlockMakerprogram．Afull—lengthcDNAsequence(Genbankaccessionnumbers： EF508689nadEU567325)wasobtainedthroughhtema plificationusingaSMARTerMTRACEcDNAAmplificationKit(TaKaRa, Dalian，China)，whereasthesequenceobtainedusinga5-RACEsystem (ve~ion2．0，InvitrogenMTLifeTechno