懊逮微量提取竹子叶片DNA的方法.pdfVIP

维普资讯 磊I I4·蕉 棚 2005年 第3卷 第4期 Vo1．3No．4．2005 懊 逮 微 量 提 取 竹 子 叶 片 DNA 的方 法 文兰 高健 李雪平 高志民 李潞滨 彭镇华 (国际竹藤网络 中心 北 京 100102) (中国林业科学研究院林业研究所 北 京 100091) 摘 要 介绍 了一种快速微量提取角竹叶片DNA~-J方法。该方法简便易行，操作简单，所需 材料少，提取的DNA纯度较高，OD 。／OD 。一般在1．9左右，可满足一般的RAPD、SSR、 转基因植株的PCR检测为基础 的实验需要 。 关键词 角竹 ；基因~．ItDNA；快速法；微量 ARapidMethodforIsolationDNAfrom SmallAmountLeaveofBamboo Abstract：InthisarticlearapidmethodforisolationofgenomicDNA from frozenPhyllostachys fimbriligulaleavewasproposed．Themethodisverysimpleandrapid．TheisolatedDNAhasgood puritywithOD260／OD280from 1．9to2．1，andcanmeettherequirementofrPCR，basedtechnology， suchasRAPD，SSRandPCRdetectionoftransgenicplants． KeyWords：Phyllostachysfimbriligula；genomicDNA；rapidmethod；smallamountleave 植物基 因组 DNA的分离是生物工程 中的基本 1材料与方法 操作之一，对此 已有大量研究报道 。依据所采用 1．1材 料 的原理不 同，植物基 因组DNA的提取方法主要有 SDS和 CTAB法，这两种方法各有优缺点，但步骤 本实验 以莉竹超族倭竹族刚竹亚族 刚竹属刚 较为繁琐 ，所用时间较长 ，需要较多的植物材 竹组 的角竹 (PhyUostachysfimbriligulaWen)为实验 料，有时不能满足现代分子生物学研究的需要。 材料 (取 自中国林科院 良乡基地 ，北京)。 故而如何快速而高质量地提取基 因组DNA的问题 就显得非常重要 。CTAB法和 SDS法作为一种常规 1．2仪器和设备 植物 DNA提取 的方法 已被广泛使用 ，禾本科植物 离心机 (Eppendorf5417C)，紫外分光光度计 上 的应用也不少 ，如水稻等 ，而竹子和水稻 同属 (UV3300)，水平电泳仪 (Biorad)，紫外凝胶成 禾本科 ，在进化上有较近 的亲缘关系 。竹 叶中的 像系统 (Alpha2200)，PCR仪 ，恒温水浴锅等 。 蛋 白质 ，多糖 以及酚 、脂类等次生代谢物质给 DNA的提取和纯化造成很大 的困难 。毛燕等对毛 1．3试剂 竹等 9种竹 叶片 的研究结果表 明，竹 叶中蛋 白 DNA提取缓冲液 (1MTrisHC1， (pH8．0)， 质 ，多糖的含量较高