蟑螂变应原Cr2PI包涵体的变复性研究.pdfVIP

第 11 卷 　第 2 期 寄生虫与医学昆虫学报 Vol11 , No2 2004 年 6 月 Acta Parasitol. Med. Entomol. Sin. Jun. , 2004 蟑螂变应原 CrPI 包涵体的变复性研究 1 1 ,2 2 2 高　波 　刘志刚 　苏东明 　罗时文 ( 1 深圳大学生命科学学院 　510680 ; 2 深圳市微生物基因工程重点实验室 　518060) 摘要 　本研究优化了 GSTCr PI 融合蛋白在大肠杆菌中的诱导表达条件和 GSTCr PI 包涵体的复性条件 ; 采 用 Glutathione SepharoseTM 4B 亲和层析分离纯化融合蛋白 , 以 Xa 酶切去掉其 GST 标签后 , 对 Cr PI 进行了电 喷雾电离串联质谱分析 ( ESIMSMS) 。结果表明 , IPTG浓度对该蛋白的诱导效果影响不大 , OD600 值为 06 时诱导效果最佳 ; 复性蛋白浓度和 L精氨酸浓度对稀释复性结果有重要影响。纯化融合蛋白经 Xa 酶切、 分子筛层析去掉 GST 标签后 , 重组蛋白的纯度达 95 % , 经质谱进一步鉴定为蟑螂 Cr PJ 变应原。 关键词 　蟑螂 ; CrPI; 包涵体 ; 变复性 ; 质谱 ( ) μ 　　变态反应性 过敏性 疾病被世界卫生组织 次后 , 加 DNase Ⅰ至终浓度为20 gmL , 室温放 (WHO) 认为是当前世界性的重大卫生学问题 , 置 30min , 离心后分别取上清与沉淀进行 SDS 随着人们生活方式的变化和环境污染 , 变态反应 PAGE 分析。 性疾病的发病率不断上升 ( Ruffilli 和 Bonini , 112 　IPTG 浓度 : 挑取携带 p GEX5X1Cr PI 重 ) ( μ 1997 。自Bernton 和 Brown 于 1964 年通过皮试和 组载体的菌株BL21 接种于 5mL LB 液 含 100 g ( ) mL 氨苄) 中 , 37 ℃160rmin 摇菌过夜 , 次日以 支气管激发试验 BPT 发现纽约 45 %的哮喘患 者对蟑螂变应原过敏从而引起 Ⅰ型变态反应后 , 1 %的接种量转种于 6 个含 20mL LBAmpr 的三角 ( 杯中 , 37 ℃240rmin 摇菌至 OD 值为 06 , 分别 国内外学者对蟑螂和变态反应性疾病 如外源性 哮喘等) 的关系作了研究 , 证实蟑螂是外源性哮 加入 IPTG 至终浓度为 01mmolL 、02mmolL 、 喘的主要诱因之一 ( Rosenstreich et al . , 1997) 。 04mmolL 、06mmolL 、08mmolL 、10mmol L , 本研究旨在优化蟑螂 Cr PI 包涵体蛋白的变复性 继续培养 5h 。收集诱导菌体进行 10 % SDSPAGE 及重组子的诱导表达条件 , 提供纯化的重组 Cr 分析。