基于荧光增强效应的可逆型牛血清白蛋白光化学生物传感器研.pdfVIP

( ) 第 30 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究报告 第 3 期 　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　 2002 年 3 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 257～261 研 究 报 告 基于荧光增强效应的可逆型 牛血清白蛋白光化学生物传感器研究 李　军　王柯敏 　肖　丹　羊小海　何晓晓 (湖南大学化学化工学院 ,长沙 410082) 摘 　要 　研究了一种具有可逆响应的蛋白质生物传感器。敏感层由丙烯酰胺荧光素固定于硅烷化的平面波 ( ) 导上形成 ,然后装配在自制的流通池中并用光导纤维连入荧光分光光度计 ,结果发现牛血清白蛋白 BSA 对 μ 此敏感膜有明显的荧光增强反应 ,在 0. 4～20 mol/ L 范围内敏感膜的荧光增强度与 BSA 的浓度呈线性关系 , μ 检测下限为 01 mol/ L 。并且此传感器无需特殊的试剂对其进行再生 ,等电点不同的蛋白质引起的荧光增强 程度也不同 ,常见的金属离子对测定无影响 ,但重金属离子对测量有较大的影响。对传感器的响应机理也进 行了多方面的分析 ,推测传感器的响应可能是由蛋白质上的氨基与丙烯酰胺荧光素上的羧基发生反应引起 的。 关键词 　荧光增强 ,牛血清白蛋白 ,光化学传感器 1 　引　　言 生物传感器为蛋白质等生物大分子提供了简便 、快速的分析工具。许多基于免疫反应的蛋白质生 物传感器借助于压电石英晶体1 ,表面声波2 和表面等离子体共振3 等生物换能器得到了迅速发展。 这些传感器由于利用了特效的免疫反应 ,故具有较高的选择性。同时也造成不可逆 ,使得测定不能连续 进行 ; 因此需要在每次测量后选择一种洗脱剂对敏感膜进行洗脱后 ,才能进行下次测量。在实际测量中 连续测定生物分子的含量往往是必需的。因此 ,研究制备一种具有可逆响应的蛋白质传感器是非常有 ( ) 意义的工作。我们制备丙烯酰胺荧光聚合膜时发现 ,牛血清白蛋白 BSA 对此敏感膜有荧光增强效应 , 进一步研究发现 BSA 对此敏感膜的荧光增强效应与 BSA 的浓度呈线性关系 ,并且具有可逆性。本文探 讨了敏感膜的响应特性 ,并对传感器的响应机理进行了推测分析。 2 　实验部分 21 　仪器与试剂 ( ) ( ) M850 型荧光分光光度计 日本日立公司 ; PH3 型酸度计 上海电光器件厂 ;BSA 和 N ,N亚甲基 ( 双丙烯酰胺均为中国科学院上海生物化学研究所产品 ;氨基荧光素和丙烯酰氯分别购自 Sigma 公司 St , ) ( ) γ( ) Louis ,USA 和 Acros 公司 Pittsburgh , PA ; 甲基丙烯酰 丙基]三甲氧基硅烷由武