异型双功能交联剂SPDP对C藻蓝蛋白的光谱影响.pdfVIP

第28卷，第5期 光谱学与光谱分析 200 and May，2008 8年5月 SpectroscopySpectralAnalysis 异型双功能交联剂SPDP对C一藻蓝蛋白的光谱影响 颜世敢1’3，陈秀兰1，张熙颖1，周百成1’2，张玉忠h 1．山东大学微生物技术国家重点实验室，山东济南250100 2．中国科学院海洋研究所，山东青岛266071 3．山东省动物疫病防治与育种重点实验室，山东济南250100 摘要一步阴离子交换层析法由钝顶螺旋藻中高效制备高纯度的C．藻蓝蛋白，纯化的C．藻蓝蛋白最大吸 收峰位于620nITl，室温最大荧光发射峰位于640nIn。用异型双功能交联剂SPDP对C-藻蓝蛋白进行蛋白质 交联，不同摩尔比的SPDP对C-藻蓝蛋白溶液的吸收光谱和室温荧光发射光谱有显著影响。随着SPDP／C- 藻蓝蛋白摩尔比的增加，C-藻蓝蛋白的吸光度和相对荧光强度均不同程度降低，且室温荧光发射峰由640 nm蓝移至630nm。光谱研究结果表明用SPDP对C-藻蓝蛋白进行蛋白质交联时SPDP／C-藻蓝蛋白的摩尔 比应小于100，否则荧光强度和荧光特性将发生显著改变。 -- 关键词C-藻蓝蛋白；SPDP；光谱 中图分类号：Q586文献标识码：A 文章编号：1000-0593【2008)05-1115—03 聊盯的还原下产生巯基，再通过巯基交换反应或巯基加成 引 言 反应与另一个蛋白质分子交联，产生异二聚物蛋白质。以 SPDP为交联剂进行的蛋白质化学交联的优势在于：SPDP 不破坏生物大分子自身的二硫键，能有效避免生物大分子的 G藻蓝蛋白(C-phycocyanin，C-PC)是一种存在于蓝藻中 生物学活性损失；SPDP为异型双功能交联剂，能避免分子 的主要的捕光色素蛋白，以(神。或(ap)e形式存在。C-藻蓝 蛋白具有安全无毒、水溶性大、色泽鲜艳、荧光明亮的特性 内和同种分子间的基团交联，提高交联效率和交联质量； nlTl处有吸光度，能够方便地 及抗氧化、抗疲劳、抑瘤、增强免疫等多种生物学活性，被 SPDP衍生的吡啶二硫基在343 广泛用作食品和化妆品的色素、荧光检测试剂及药物(如抗 测定其含量，从而实现定量交联。 氧化剂、示踪剂、光敏治疗剂、免疫增强剂等)。由于具有与 使用交联剂SPDP在G藻蓝蛋白上引入吡啶二硫基，在 其他合成的荧光染料明显不同的特性，如无毒性、水溶性 一定的SPDP／C-藻蓝蛋白摩尔比范围内，吡啶二硫基的引人 大、性质稳定、摩尔消光系数大、荧光量子产率高、表面活 性基团多、易于交联等特征，使包括c_藻蓝蛋白在内的所有 白摩尔比对C-藻蓝蛋白的光谱特性有无影响，至今尚无报 的藻胆蛋白成为优良的荧光染料，国外已经将其开发成商品 道。本文以光谱为表征，首次报道了SPDP／C-藻蓝蛋白的摩 化的荧光检测试剂，用于荧光免疫分析[1]。藻胆蛋白用于荧 尔比对C-藻蓝蛋白的光谱性质影响。 光检测时要先借助化学交联剂将其与抗体、生物素、抗毒素 等生物大分子交联成荧光探针，才能用于荧光免疫分析。 1实验部分 N-琥珀酰亚胺3-(2一吡啶基二硫)丙酸酯(3一(2一Pyridyldi- acid N-hydroxysuccinimideester，SPDP)是一1．1主要仪器和试剂 thio)propionic 种常用的异型双功能交联剂，