双色FISH检测人精子染色体非整倍体方法的建立.pdfVIP

·6 · 　中国优生与遗传杂志 2002 年第 10 卷第 3 期 双色 FISH 检测人精子染色体非整倍体方法的建立 ( ) 陈欣洁 ,孙筱放 ,黄艳仪 ,廖宝平 ,陈元本 　 广州医学院附属市二医院妇产科研究室 ,510150 ( ) 摘 　要 : 　目的 　建立用双色FISH 检测人精子染色体非整倍体的方法。方法 　采用双色荧光原位杂交 FISH 方法取适 ( ) 量精子标本用 EDTA/ PBS 处理 ,然后用二硫苏糖醇 DTT ,使精子去凝集。固定后滴片 ,然后与双色荧光直接标记探针杂交。 结果 　在 OLYMPUS 荧光显微镜下可以清楚看到精子头部的蓝色杂交信号 ,头部有 1 个绿色荧光杂交信号的精子为 X 染色体 ( ) ( ) 精子 X 精子 ,有 1 个红色荧光杂交信号的精子为 Y 染色体精子 Y 精子 。精子头部有2 个荧光杂交信号的精子为染色体数 ( ) 目异常精子。结论 　双色荧光原位杂交 FISH 方法可以用于测定人精子染色体非整倍体率的变化。 关键词 : 　荧光原位杂交 ;人精子染色体 ;非整倍体 　　染色体数目异常是最常见的遗传缺陷。在人类受精卵 探针为 α- 卫星 Y 染色体着丝粒特异 DNA 探针 p111 - 中 , 具有染色体异常的约占 10 %～30 % , 其中以非整倍体 q111 (DYZ3) 。 最为常见 , 对人类的危害也最大[1 ] 。因此 , 了解非整倍体 6. 变性 : 将探针从 - 20 ℃取出 , 平衡至室温 ; 充分混 的发生机制 , 确定其诱发因素 , 从而减少非整倍体的发生 , 匀探针 ; 每次试验取 10μ l 探针置于离心管中 ; 将探针放入 引起了人们普遍关注。由于绝大多数非整倍体起源于减数 ( ) 水浴 75 ℃, 7min , 迅速放入冰格至少 3min 避光 ; 玻片放 分裂过程中染色体的分离异常 , 于是对配子染色体的分析 入变性液 (70 % Formamide + 2 ×SSC) 中 , 72 ℃, 2min , 迅 显得尤为重要[2 ] 。精子 - 仓鼠卵融合技术和精子荧光原位 速 放 入 冰 酒 精 ( 70 % , 85 % , 100 %) 各 2min , 风 干 ( ) 杂交 fluorescence in situ hybridization , FISH 技术是主要的 ( ) 37 ℃ 。 两种精子染色体分析方法。其中荧光原位杂交是细胞遗传