药物诱导与耐药基因转染两种方法建立的人食管癌顺铂耐药细胞系的比较.pdfVIP

· 726 · 广东医学 2012年 3月第 33卷第6期 GuangdongMedicalJournalMar．2012．Vo1．33．No．6 药物诱导与耐药基因转染两种方法建立的 人食管癌顺铂耐药细胞系的比较 李敏，轩小燕，黄玉敏，臧文巧，赵国强 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室(郑州450001) 【摘要】 目的 比较药物诱导和耐药基因转染两种方法所建立的人食管癌顺铂耐药细胞系的不同特点。方 法 顺铂 (cDDP)中等浓度、间歇作用法历时9个月建立食管癌耐药细胞系Ec9706／cDDP；同时采用脂质体转染法 将人野生型DNA聚合酶B(po131)的重组绿色荧光蛋白表达栽体pEGFP—AC3转染入食管癌细胞Ec9706，经G418 筛选得到稳定转染细胞系Ec9706一AC3。荧光显微镜观察转染效果，普通倒置显微镜观察细胞形态变化。绘制 生长曲线，计算群体倍增时间。RT—PCR方法检测细胞中po131mRNA的表达水平，MTT法测细胞对顺铂的敏感 性，并观察冻存复苏、撤药培养对耐药性的影响。结果 两种方法所获耐药细胞与亲本细胞相比形态无明显变 化，po131mRNA表达均增加。Ec9706／cDDP耐药指数为 l5．70-4-1．16，冻存复苏对耐药指数影响不大，而撤药培养 可使耐药性降低，细胞群体倍增时间延长；Ec9706一AC3细胞耐药指数为 1．78±0．67，不受冻存复苏、撤药培养的 影响，细胞群体倍增时间不变。结论 用不同方法成功建立两种人食管癌顺铂耐药细胞，不同方法获得的耐药细 胞生物学特性有所不同。 【关键词】 DNA聚合酶p；食管癌细胞 ；耐药细胞；转染 Comparisonbetweenhumanesophagealcarcinomadrug—resistantcelllinesestablishedwith twodifferentmeth- ods． L／Min，XUANXiao—yan，HUANGYu—min，ZANGWen—qiao，ZHAOGuo—qiang．DepartmentofMicrobiolo— gYandImmunology，CollegeofBasicMedicalSciences，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450001，China Correspondingauthor：ZHAO Guo—qiang．E—mail：zhaogq@ ．edu．en 【Abstract】 0bjective Tocomparethebiologicalcharacteristicsofthe2humanesophagealcarcinomadrug—re— sistantcelllinesestablishedbypulsedrugexposureandtransfectionofDNApolymerasebeta(po131)gene．Methods Thedrug—-resistantcelllineEc9706／cDDPwasestablishedinculturebypulseexposingEc9706cellstomoderateconcen-· trationofcisplatin(cDDP)overaperiodof9months．Therecombinedenhancedgreenfluorescentprotein(GFP)vector pEGFP—AC3carryingwidetypeDNA polpgenewastransfectedintoEc9706cellsbyiipotransfection，andthestable transfectantEc9706一AC3wasscreenedbyG418．Cellgrowthcurveswereconstructedforassessmentofdoublingtime． Expressionofpo131wasconfirmedbyRT—PCR．TheresistanceindextocDDPwasdeterminedbythemethylthiazolyltet— razoliumassay(MTr)．Results Therewasnosignificantmorphologicdifferencebetweenthe2establishedhumanesoph— agealcarcinomadrug—resistantcelllines，inwhichpoll~expressionlevelwassignificantlyincreased．Theresistan