参芪复方对自发性2型糖尿病GK大鼠氧化应激损伤的影响.docVIP

yuezx2006@126.com 参芪复方拮抗自发性2型糖尿病GK大鼠氧化应激损伤的实验研究 王艳红1 岳宗相1 刘致勤1 喻国1 杨若愚1 谢春光2 (1 眉山市中医院，四川 眉山 612160；2成都中医药大学，四川 成都 610075) 【摘要】 目的 观察参芪复方对自发性2型糖尿病(T2DM)动物GK大鼠体内氧化应激系统的影响。方法 选取5月龄SPF级雄性GK大鼠55只，随机分为空白组、模型组、西药组、中药组，另设15只Wistar大鼠为正常组。连续灌药4w后，光镜下观察动物胸主动脉病理学改变，放免法检测动物血清H2O2、MDA、CAT、SOD水平变化。结果 模型组血清MDA含量明显高于空白组、wistar组、中药组和西药组（P0.05），中药组和西药组相比无统计学差异（P0.05）；模型组血清SOD水平低于中药组、西药组（P0.05），中药组与西药组相比较无统计学差异（P0.05）；模型组血清CAT水平明显低于空白组、正常组、中药组和西药组（P0.05），中药组血清CAT水平明显高于西药组，差异有统计学意义（P0.05）；模型组大鼠血清H2O2含量水平高于中药组（P0.05）。结论 参芪复方能够拮抗GK大鼠氧化应激损伤，调整氧化/抗氧化失衡状态，可能是拮抗糖尿病血管病变的作用机理。 【关键词】：参芪复方；氧化应激；动脉粥样硬化；中医药 糖尿病是因体内胰岛素绝对或相对不足和或胰岛素抵抗引起的以血糖升高为特征的慢性代谢性疾病，据2011年国际糖尿病联盟的一项报告显示，目前全世界糖尿病患者已达到亿年的2.85 亿增加近30%是1980年人数的两倍多[1]。大量研究[2] [3] [4]表明糖尿病及其并发症与氧化应激密切相关，拮抗氧化应激损伤成为防治2型糖尿病研究的热点[5]之一。在糖尿病并发症的防治上，我们也做了大量的研究，前期研究显示参芪复方具有防治早期动脉硬化[6]的作用，它可以降低糖尿病模型大鼠血糖、血清炎症标志物[7]，具有抑制胰岛B细胞凋亡[8]的作用。为了更好地阐释参芪复方拮抗糖尿病血管病变的作用机理，进行了如下实验： 1 材料与方法 1.1 动物及分组 5月龄雄性SPF级GK大鼠57只及正常Wiatar大鼠15只（由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供），按2~3只/笼饲养于四川省医学科学院实验动物中心动物饲养室内。适应性饲养1w后，取尾静脉血测随机血糖，排除随机血糖＜11.1mmol/L的GK大鼠2只，余55只按血糖由高到低排列编号，查随机数字表随机分为空白组、模型组、西药组和中药组；排除随机血糖＞6.7mmol/L的Wistar大鼠1只，余14只做为正常组。 1.2 建立模型及给药 给予模型组、西药组和中药组大鼠一氧化氮合成酶（eNOS）抑制剂L-NAME进行造模（按照0.1mg/ml浓度计算将L-NAME加入灭菌纯净水中，由大鼠自由摄取）；给予正常组及空白组大鼠饮用灭菌纯净水，由大鼠自由摄取；给予空白组、模型组、西药组和中药组大鼠高脂饲料（普通全价饲料占88.2%，精炼猪油占10%，胆固醇占1.5%，猪胆盐占0.3%）喂养，给予正常组大鼠普通全价大饲料喂养，由大鼠自由摄取，造模时间为35天。 造模同时开始给药，给药方法如下： 1.2.1 正常组、空白组及模型组动物 按5ml/kg/d灌服生理盐水，1次/d，连用35d； 1.2.2 西药组（阿托伐他汀）按1.6mg/kg/d（相当于体重为60kg成人20mg/d剂量的5倍）灌服阿托伐他汀钙混悬液，1次/d，连用35d； 1.2.3 中药组（参芪复方） 按1.44g/kg/d(相当于体重为60kg成人剂量的10倍)灌服参芪复方混悬液，1次/d，连用35d。 1.3 观察指标及检测方法 1.3.1 一般情况观察 自用药开始，每日观察并记录各组大鼠的一般活动情况、精神状态情况、摄食及饮水情况、小便颜色及尿量情况、体毛色泽变化及脱落情况。每周称量大鼠体重一次，并根据体重及时调整给药。 1.3.2 测空腹血糖 给药35天后，处死前一日晚8时开始禁食不禁水，处死大鼠前当天上午8时运用葡萄糖氧化酶法测大鼠空腹血糖。 1.3.3 血清MDA、H2O2、SOD、CAT水平检测 采动物股动脉血8-10ml后立即放置于离心机中，以3000r/min离心15分钟，取上清液采用放射免疫法测定血清MDA、H2O2、SOD和CAT水平，具体操作步骤按照试剂盒说明书进行，结果数据采用四参数模型软件处理，得出测定值。 1.3.4 腹主动脉病理学观察 处死大鼠后迅速剥离其腹主动脉，置于4%的多聚甲醛液中固定，用于制备病理切片，100倍光镜下观察，使用计算机图像分析系统测截面泡沫细胞及纤维组织增生面积，计算增生泡沫细胞及纤维组织占据管腔直