玉米大斑病菌培养与DNA提取方法.pdfVIP

农业科技通讯 2009.1 试验研究 玉米大斑病菌培养与DNA 提取方法 1,2 2 2 张明会 姜 钰 徐秀德 （1.沈阳农业大学植物保护学院 辽宁沈阳 110161； 2.辽宁省农业科学院植物保护研究所 沈阳 110161） 摘要：采用液体静置和振荡两种培养方法进行菌丝培养，以不同省份的玉米大斑病菌为材料，优化 CTAB 法提取玉米大斑病菌DNA 。 提取后的DNA 经紫外分光光度计在260nm 和280nm 测定及 0.4%琼脂糖凝胶电泳检测，结果表明，液体培养皿法培养菌丝快速、高效，提取DNA 的质量好、纯 度高。 关键词：玉米；大斑病菌；病菌培养； 提取 DNA 玉米大斑病 [Exserohilum turcicum(Pass.)Leonard 1.2.1.1 液体平板静置培养法 挑取适量菌丝体移 是当今世界上玉米主要叶部病害之一。 在我 入装有马铃薯蔗糖 液体培养基的培养皿中，装液 et Suggs] (PD) 国，以东北、华北北部、西北和南方山区的冷凉玉米 量为培养皿容量的 ，接种菌丝体悬浮于液体培养 1/3 产区发病较重，一般年份减产 左右，严重流行年 基表面， 培养 ；当病菌在液体培养基上形成 20% 25℃ 3~4d [1~3] 份减产可达 以上 。 世纪 年代后，由于抗 菌落，用灭菌牙签挑取菌落，无菌水冲洗一次，吸去 50% 20 70 病品种的推广应用，该病害一度得到控制。 近年来， 多余水分，将菌体 菌丝和孢子 收集于离心管中，用 ( ) 随着栽培技术不断改革， 玉米品种的更换和病原菌 冷冻干燥机－110℃冻干2~3d ，研磨成粉末，备用。 群体的变异，该病呈现明显加重趋势，仍是生产上不 1.2.1.2 液体振荡培养法 挑取适量菌丝体移入装 可忽视的重要病害。 进行群体遗传研究可采用分子 有 液体培养基的三角瓶内， 振荡培养 。 PD 25℃ 5～6d 标记技术。 快速地提取高质量的DNA ，可大大提高工 灭菌纱布过滤获取菌体，无菌水冲洗 1~2 次，吸去多 作效率。 但目前已报道研究结果差异较大，由于培养 余水分， 在研钵中加液氮研磨成干粉， 收集干粉备 及操作方法，影响结果准确性。 本研究对玉米大斑病 用。 菌的培养和DNA 提取方法进行探讨，旨在为从分子 1.2.2 DNA 提取 水平上研究玉米大斑病菌种群致病力分化提供实用 采用CTAB 法，略有改进。 技术。 利用 DNA 分子标记技术探索遗传信息多态 ① 取菌株粉末 16mg 放入 1.5ml 离心管中， 以 性， 从而揭示个体间或种群间分子水平上遗传变异 0.03ml/mg 比例加入 CTAB 提取缓冲液(1.4mol/L