冬凌草甲素诱导HepG2肝癌细胞凋亡机制的研究.pdfVIP

2010年 l2月 第 l2卷 第 12期 中国现代中药ModernChineseMedicine Dec．2010 Vo1．12 No．12 藿嘲 冬凌草甲素诱导HepG2肝癌细胞凋亡 机制的研究△ 黄健 ，魏秀岩 ，孙博航 ，吴立军 ，池岛乔 (1．沈阳药科大学中药学院，辽宁 沈阳 110016；2．沈阳药科大学生命科学与生物制药学院， 辽宁 沈阳 110016；3．沈阳药科大学中日医药研究所，辽宁 沈阳 110016) [摘要] 目的：研究冬凌草甲素(oridonin)诱导HepG2凋亡的分子机制。方法：MTI法 、Hoechst33258荧光 染色、流式细胞分析法和Westernblot分析法。结果：冬凌草 甲素诱导 HepG2细胞发生死亡呈时间和浓度依赖性， 其作用24h的半数有效抑制浓度IC。=(29．7±1．5)p．molL·～。Hoechst33258荧光染色证明冬凌草甲素诱导 HepG2 细胞发生了凋亡；30I．~mol·L 冬凌草甲素作用于HepG2细胞使之产生大量的活性氧 自由基(reactiveoxygenspecies， ROS)，p53抑制剂 PFTct显著地抑制了ROS的产生 ，从而抑制了细胞凋亡的发生；在 HepG2细胞中，30I~mol·L 冬凌草甲素促进了Bax的表达，抑制了Bcl-2的表达，同时线粒体下游蛋白caspase-9，-3的抑制剂明显地抑制了30 p~mol·L 冬凌草甲素诱导的HepG2细胞凋亡。结论：冬凌草甲素通过 p53蛋白诱导ROS的产生 ，从而导致 HepG2 细胞凋亡，除此之外冬凌草 甲素还通过线粒体途径诱导 HepG2细胞凋亡。 [关键词] 冬凌草甲素；HepG2细胞；凋亡；ROS；Caspase 冬凌草 甲素 (oridonin)是植物碎米桠 Rabdosia 了初步的探讨。 rubeseens(Hems1．)Hara中的一种四环二萜类化合 CH2 物，化学结构见图 1。冬凌草 甲素还来源于其他主 要植物，如延命草 Isodonjaponicus，毛叶香茶菜尺． rabdosia，香茶 R．amethystoides，显脉叶香茶菜 R． nervosa，道孚香茶菜R．downsis等。冬凌草 甲素对多 种肿瘤细胞均有显著抑制或杀伤作用，其对人体肝 图1 冬凌草甲素的化学结构 癌细胞系BEL-7401细胞株具有较强的杀伤作用 口， 1 仪器与材料 与5．氟尿嘧啶相比，其作用更强。复方冬凌草 甲素 对肺癌细胞系 SPCA—l细胞株具有明显的体外细胞毒 RPMI1640培养基 (Hyclone)，胎牛血清 (北京元 活性 。其机制主要表现为细胞端粒酶活性明显下 亨圣马生物试剂公司)，甲基噻唑蓝 lTI1(Amresco)， 调，其对细胞粒端酶活性的调节可能是通过间接途 Nacetyl—cysteine (NAC)、Hoechst 33258、2，7． 径实现的，其中凋亡途径可能参与了端粒酶活性 的 dichlorofluoresceindiacetate(DCF-DA) (Sigma)。z— 调控。冬凌草甲素可以逆转耐药性细胞系K562／A02 LEHD—fmk，z．IETD．fmk 和 z—DEVD．fmk (Enzyme 的耐药性，能诱导 HL-60细胞凋亡，与其细胞杀伤 System Products，CA，USA)。PFT (Plymouth 活性相互平行，提示冬凌草 甲素的抗癌活性与诱导 Meeting，PA，USA)。Bax和 Bcl-2多克隆抗体、 ． 肿瘤细胞凋亡相关 4J。 actin、辣根过氧化酶标记 的羊抗兔、羊抗 鼠二抗 在初步研究冬凌草 甲素抗肿瘤机制过程中，我 (Sa