临床样品与石蜡组织之miRNA芯片研究方案.pdfVIP

科技 science topics 专题 临床样品与石蜡组织之 miRNA 芯片研究方案 近年来 miRNA 研究扩展至 circulating 其中 RNA ；另一种方法则是将血清中所有的 lipid miRNA ，多数科学家开始了解身体循环系统或临床 particles 进行破碎再萃取其 RNA 。前者已有商业 可取得的样品，可能含有新的生物标记，因此若能 试剂可进行萃取，后者则可以在实验室以 Trizol LS 以非侵入性的检体进行早期的疾病检测，,对于疾病 Reagent 改良进行萃取，就成本与试剂取得容易度 的发现与治疗有非常大的帮助。华联除提供以 2011 来考虑，建议以血清直接萃取的方式来获得 年 11 月 Sanger miRBase r18 版的人类 miRNA miRNAs 。加入 Trizol LS Reagent 后，需进行有机 芯片外，本期华联快讯与大家分享如何进行临床样 分层步骤萃取并重复2-3 次，确保 RNA 皆能释放 品如血清/血浆、腹水、尿液与石蜡组织中的 miRNA 出来。再利用 Isopropanol 沉淀并将时间延长至隔 芯片研究。 夜，经沉淀离心后取得之 RNA 分子需再进行一次 的去盐纯化步骤。未进行纯化步骤的 220-300 nm 吸收图谱如图一 (A)，易影响核酸在 A260 吸收值 临床样品 small RNA 提取 的判读。增加纯化步骤后，220-300 nm 吸收图谱如 血清 /血浆中 miRNA 在许多文献中已被 图一 (B) ，推测在血清中可能存在某些物质成分在 科学家证实具有高稳定度，并未与其他种类的 230 nm 之前具吸收光，在miRNA 质量的判读上， RNA 一样容易被 内源性 RNA 降解酶 若260 nm 仍为220-300 nm 吸收图谱中的波峰时， (endogenous RNase) 破坏，而是受到 lipid particle 则可视为正常血清 miRNA 吸收图谱。一般正常情 的包埋保护如 microvesicles 或者 exosome 中，且 况下，获得的 RNA 在 A260/280 比值约 1.2、 miRNA 亦被研究证实具有调节基因表现的功能 A260/230 则约在 0.3-0.6 的比值，以 Agilent 1-3 。 Bioanalyzer 进行毛细管电泳分析，观察到在 5S 区 血清萃取 miRNA 的方法主要可分为两大类， 域具有明显的波峰 ( 图一 (C))，表示自血清萃取的 一种是针对 exosome 进行分离后再将其破坏萃取 RNA 确实为小片段的 RNA 。一般而言，2 ml 血清 1 华联快讯 2012.04 科技