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环境三致物的生物检测 环境三致物：指能致畸、致癌、致突变的物质 项目九 蚕豆根尖微核监测技术 一、蚕豆根尖微核技术的原理 有丝分裂各时期 植物细胞的有丝分裂 有丝分列各期图像 项目九 蚕豆根尖微核监测技术 一、蚕豆根尖微核技术的原理 项目九 蚕豆根尖微核监测技术 二、受试生物材料 项目九 蚕豆根尖微核监测技术 2. 处理根尖 项目九 蚕豆根尖微核监测技术 4. 根尖细胞的固定 项目九 蚕豆根尖微核监测技术 (4) 在暗室或遮光的条件下加席夫（Schiff）试剂，染色1～4h 项目九 蚕豆根尖微核监测技术 7. 镜检及微核识别标准 项目九 蚕豆根尖微核监测技术 五、实验数据的统计处理和污染程度的划分 项目九 蚕豆根尖微核监测技术 3. 如果被检测的样品较多，可先用方差分析（F检验）看各样品的MCN‰平均值与对照的差异显著性。 项目九 蚕豆根尖微核监测技术 2. 利用“污染指数” 进行评价 * * DNA 基因 染色体 的作用 检测DNA损伤，DNA损伤修复等 检测三致物对 基因突变，包括正向突变和回复突变 染色体畸变试验；微核试验；SCE试验 特点：时间短、成本低、结果可靠 让我们复习一下细胞有丝分裂的过程吧 蚕豆根尖细胞在进行有丝分裂过程中，染色体经常发生断裂，但一般情况下，断裂可以自行愈合，如果受到有害因子的攻击，染色体就不能愈合，甚至增加断裂，形成染色体片段，这些染色体片段由于缺乏着丝点而不能到达细胞的两极，而留在细胞质中，一旦新细胞核形成，这些片段就形成大小不同的小核，即微核。因此，我们可以根据微核率的高低说明诱变物的强弱。 松滋青皮豆 ，或其他蚕豆品种 1. 蚕豆浸种催芽 25℃，浸泡26～30h 浸种 催芽：用纱布松松包裹吸涨的种子置解剖盘内，保持湿度，在25℃的温箱中催芽12～30h。待种子初生根露出2～3mm，再选取发芽良好的种子，放入铺满薄层湿脱脂棉的解剖盘内，仍在25℃下催芽36～48h，当大部分种子的初生根长至2～3cm时，即可用于处理 三、试验步骤 每一处理选取6～8粒初生根生长良好，根长一致的种子，放入盛有被测液的培养皿中，让被测液浸泡住根尖即可，用自来水（或蒸馏水）作对照处理，方法相同。处理时间为4～6h。 3. 根尖细胞恢复培养 将处理后的种子，用自来水（或蒸馏水）浸洗3次，每次2～3min，然后把洗净的种子再放入湿脱脂棉盘中，按前述培养条件恢复培养22～24h 将恢复后的种子，从根尖顶端切下lcm长幼根放入青霉素空瓶中，加卡诺氏液固定24h 5. 孚尔根（Feulgen）染色 (1) 固定好的幼根，在青霉素瓶中用蒸馏水浸洗2次，每次5min (2) 吸净残水，再加5mol/LHCI将幼根泡住，连瓶放入28℃水浴锅中水解幼根25min左右，至幼根被软化即可 (3) 用蒸馏水浸洗幼根2次，每次5min (5) 除去染液，用SO2洗涤液浸洗幼根2次，每次5min (6) 用蒸馏水浸洗1次，5min (7) 将幼根放入新换的蒸馏水中，置4℃的冰箱内保存，可供随时制片之用。 6. 制片 45%醋酸 压片法 ◆大小是主核大小的1/3以下，并与主核分离； ◆形状为圆形、椭圆形或不规则形； ◆着色与主核相当或稍浅 每一处理观察3个根尖，每个根尖随机计数1000个细胞中的微核数 （一）数据处理 1. 按以下公式计算各测试样品（包括对照组）的微核千分率（MCN‰） MCN‰= 某测试点（或对照组）观察到的MCN数 某测试点（或对照组）观察到的细胞数 × 100％ 2. 如果被监测的样品不多，可直接用各样品MCN率平均值与对照比较（t检验），从差异的显著性判断水质污染与否 （二）结果评价 1. 利用“MCN‰”进行评价 10‰ 无污染 10‰～18‰ 轻污染 18‰～30‰ 中污染 30‰ 重污染 PI值越高，说明污染越重。 0～1.5　基本没有污染 　1.5～2　　轻污染 　2～3.5　　中污染 　3.5　　　重污染 （三）结果报告 *