雷莫拉宁生物合成中一个独立非核糖体合成酶的体内功能研究.pdfVIP

雷莫拉宁生物合成中一个独立非核糖体合成酶的体内功能研究 潘海学1，2 李继安1 邵雷1 朱春宝1 陈代杰1* 1.上海医药工业研究院创新药物与制药工艺国家重点实验室，上海200040 2.中国科学院上海有机化学研究所生命有机化学国家重点实验室，上海200032 摘要：雷莫拉宁是由游动放线菌产生的具有新型结构的脂肽类扰生索，其对于抗万古霉素肠球菌感染的治 疗现在处于Ⅲ期临床阶段。雷莫拉宁的肽链骨架是由非核糖体合成酶(NRPS)负责合成。据文献推测， 一个单独的 NRPS蛋白 Ramo-orf17可能负责线性NRPS蛋白 Ramo-orf13中第6个模块对苏氨酸的活化和 上载，但是并没有任何的实验证据证明。本文利用同源重组双交换和位点特异性插入等方法，系统地进行 了体内的基因敲除和基因回补实验。并构建了一个的含有Ramo-orf17的N端区域和另一个NRPS的腺苷化 域-肽基载体蛋白区域的杂合蛋白的编码基因，在基因同补实验中成功恢复了雷莫拉宁的产生.这些结果首 次证明了Ramo-orf17的作用，并发现这个NRPS蛋白的N端区域在雷莫拉宁的生物合成中至关重要。 关键词：游动放线菌;恩拉霉素；非核糖体合成酶;雷莫拉宁 Geneticmanipulation