实时荧光定量PCR的原理和解决方案-北京大学第一医院.pdfVIP

北京大学第一医院 2013-3 实时荧光定量PCR的原理和解决方案 朱雅姝 M.D. yashu.zhu@ Customer Application System North China Life Technologies™ Proprietary | 1 Principle of Real-time PCR • Why do we develop this method? • SYBR Green TaqMan Probe • What does the result look like? Experimental workflow • Application • Workflow Life Technologies™ Proprietary | 2 2 3/11/2013 | Life Technologies™ Proprietary and confidential Real-time PCR VS End-piont PCR 96个重复 不同的平台期 物 产 R C 指数期的高精度 P 循环数 Life Technologies™ Proprietary | 3 3 3/11/2013 | Life Technologies™ Proprietary and confidential 什么是实时定量PCR技术  实时定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基 团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，使每 一个循环变得“可见”，最后通过Ct值和标准曲线对 样品中的DNA(or cDNA)的起始浓度进行定量的方法。  SYBR Green •绝对定量(Absolute Quantification)  TaqMan Probe –病原体检测、转基因食品检测、基因表达研究 •相对定量(Relative Quantification) -基因表达差异、药物疗效考核、耐药性研究 •等位基因分型(Allelic Discrimination) - 基因突变分析、SNP研究、物种鉴定 •阴阳性鉴定(Plus/Minus with IPC) Life Technologies™ Proprietary | 4 4 3/11/2013 | Life Technologies™ Proprietary and confidential 定量PCR仪原理与分类 Life Technologies™ Proprietary | 5 5