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第十五章 细胞工程与作物育种 Chapter 15 Cell Engineering and Crop Breeding 第一节 植物的细胞和组织培养技术 第二节 细胞和组织培养与作物育种 第三节 植物原生质体培养和体细胞杂交 细胞工程：（plant cell engineering） 以细胞为单位，在体外（in vitro）条件下进行培养、繁殖或人为使细胞的某些生物学特性按人们的意愿生产某种物质的过程。包括花药培养、体细胞变异筛选、幼胚培养、试管受精和原生质体融合等。 理论基础 细胞的全能性（cell totipotency） ： 因为细胞核内有保持物种遗传性所需要的全套遗传物质所以高度分化的体细胞具有发育成一个生物体的能力。 第一节 植物的细胞和组织培养技术 一、培养基及其组成 植物组织培养中常用的培养基主要区别在于无机盐的种类与含量。有的植物生长要求无机盐含量较高,而另一些植物则相反。 （一）培养基的种类和特点 1.MS及其类似的培养基 2.硝酸盐含量较高的培养基 3.中等无机盐含量的培养基 4.低无机盐培养基 1.MS及其类似的培养基 (1)MS培养基（Marshing和Shong，1962 ） MS培养基的无机盐成分对许多种植物均是适宜的。它的无机盐含量和离子浓度较高，微量元素种类较全，养分平衡，浓度也较高。 (2)LS培养基(Linsmainer和SKoog,1965) 其成分是大量元素、微量元素及铁盐,与MS培养基相同,有机物质中仅保留MS培养基的盐酸硫胺素0.4mg/L及肌醇100mg/L,蔗糖3%。 (3)BL培养基(Botton和Lawrene,1968) 成分和MS培养基类似。 (4)BM培养基(Button,1975) 成分与MS培养基类似,仅将盐酸硫胺素除去,蔗糖为3%。 (5)ER培养基(Eriksson,1965) 成分与MS培养基相似。 2.硝酸盐含量较高的培养基 (1)Bg培养基(Camborg等,1968) 它含有较高的硝酸盐和盐酸硫胺素,较低的氨态氮。 (2)N6培养基(朱至清等,1975) 成分较简单，KNO3和(NH4)2SO4含量高，广泛用于植物的花药培养。 (3)SH培养基(Scken和Hildebrandt,1972) 它是矿质盐浓度较高的培养基,其中铵与磷酸是从NH4H2P04提供的。 3.中等无机盐含量的培养基 (1)H培养基(Bourgin和Nitsch,1967) H培养基大量元素(无机盐)是MS培养基的一半,微量元素种类减少而浓度较MS高,维生素种类则较MS多。 (2)Nitsch(1969)培养基 与H培养基成分基本相同,仅生物素较H培养基高10倍。 (3)Miller(1963)培养基和Blaydes(1966)培养基 二者成分完全相同,与MS培养基比较,无机元素用量减少1/3~1/2,微量元素种类减少,无肌醇。 4.低无机盐培养基 (1)White(WH)培养基 无机盐的种类及用量均少于MS培养基,约为MS的1/3。 (2)WS培养基(Wolter和SKoog,1966) 适于进行生根培养。 (3)HE培养基(Heller,1953) 钾盐和硝酸盐是通过不同的化合物来提供的。 (4)改良Nitsch(1951)培养基 常用于花药和胚培养。 (5)HB培养基(Holley和Baker,1963)J 用于一些花卉植物(如康乃馨)的脱毒培养效果良好。 （二）培养基的成分 二、培养基的配制 (1)水和药品 水必须采用蒸馏水或无离子水，药品最好采用分析纯，至少是化学纯药品。 (2)母液的配置 为方便培养基的制备，现将培养基的各种成份分类配成浓缩的母液，正式配制时按规定用量稀释混合。 (3)制备培养基 (4)培养基的消毒 主要有高温高压灭菌和过滤灭菌两种方法。 三、无菌操作方法 （一）消毒剂 消毒剂 使用浓度（%） 消除难易 消毒时间（min） 消毒效果 次氯酸钠 2 易 5-30 很好 次氯酸钙 9-10 易 5-30 很好 过氧化氢 10-12 最易 5-15 好 溴水