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病毒相关胃癌基因表达谱的研究 摘 要 目的:①应用表达谱芯片技术检测分析阳性胃癌细胞系与阴性胃癌细胞系表达 谱差异,筛选可能与相关胃癌相关的差异表达基因。②选取 与阴性胃癌临床组织标本进行微小.定量检 测,探讨其表达水平与感染以及细胞差异表达基因的关系。 方法:一步法提取种胃癌细胞系,.为阳性细胞 系;为阴性细胞系总并纯化,一步法合成第一链和第 二链,利用荧光染料标记,转录合成标记的,与安捷伦人类全 基因组表达谱芯片杂交,扫描荧光信号图像,计算机分析比较阳性与阴性胃癌 细胞系之间的表达谱差异。选取特定的差异表达基因,应用实时荧光验证 试剂盒提取与组织标本 芯片结果。室法或 总,采用实时荧光定量方法检测分析两种胃癌组织中.的表达, 分析其表达水平与胃癌各种临床指标的关系。⑨结合基因表达谱的研究,利用上海 博豪生物芯片公司的系统,对.可能作用的差异基因进行分类,分析 .与感染、细胞差异表达基因的关系。 结果:阳性胃癌细胞系与阴性胃癌细胞系比较,共有条基因的表达存在 明显差异,其中与肿瘤相关的基因涉及转录翻译、信号转导、黏附、细胞增生和凋 亡以及免疫应答等多种生物学过程。选取条差异表达基因进行验证,其表达趋势 均与芯片结果一致。和组织中一扩增的△值分别为 .士.和..,统计学分析表明,两者间无显著性差异.,.。 .表达水平在性别、发病部位、病理分型和淋巴结转移的差异均无显著性差 异俨值均.,而在不同年龄组中.表达水平有显著性差异., .,~岁表达水平明显高于一岁、一岁.,.,而其他年龄 组之间差异无显著性。③相关的差异表达基因中,.可能的靶基因有 条,其中条基因功能不详,其余条基因中,与结合功能相关的基因为主。 /,%,且全部为上调基因;其次为与蛋白质结合功能相关的基因,共 条基因/,%,有条为上调基因,条为下调基因;少数靶基因涉及分子 跨膜转运、受体活化、基因的转录翻译以及细胞凋亡等功能。 结论:阳性胃癌细胞系与阴性胃癌细胞系两种细胞系基因表达存在明显差异, 提示感染可影响胃癌细胞相关基因的表达,进而在的发生、发展以 及预后中发挥作用。②差异表达基因涉及多种生物学过程,提示的发生是多基因参与的过程,多基因变异的结果,分析这些差异表达基因有助于阐明感 染在发生发展中的作用机制以及与细胞基因表达间的内在关联,为进一步 筛选特异性肿瘤标记物以及进行生物治疗提供理论依据。③感染未显 著影响胃癌组织中.表达水平,推测可能与组织中的特殊潜伏 状态有关;一在特定年龄的胃癌病人中表达水平较高,但其表达与性别、发病 部位、病理分型和淋巴结转移无关。.相关的差异表达基因中,多数涉及转 录相关基因,说明在中,和.可能在调控细胞基因转录水平上 发挥相互作用,为以后的研究提供了理论依据和研究方向。:① .② 一 ,. :① 一 , ; , ; , . 谢 ,. .② . , .查一 . , . :①,,, , ,, , . 一 .② .士.,.土.,. .仁.,. 一, ’, .., . .,芦.,~ 妒 .,.,,? . . , .,,% .,., 。/,% ,嬲 , , . : , , , . ,, ,. ,一 , ; , ’ ,. ,,一 ,. : .: : ;;; . ;;;?目 录 弓言 第章基因表达谱芯片在筛选肿瘤相关基因中的研究应用 摘要?“材料和方法?一结果 讨论 ,、结 参考文献第章相关胃癌组织中.的表达 摘要 材料和方法? 结果 讨论 、结 参考文献综述??” 综述的参考文献?:攻读学位期间的研究成果致谢学位论文独创性声明、学位论文知识产权权属引 言 病毒相关胃癌基因表达谱的研究 己言 丁 目 病毒.,是传染性单核细胞增多症的病原体,同时又 是重要的月瘤病毒,与多种肿瘤的发生有关,如鼻咽癌 ,、’淋巴瘤、何杰金氏病和/淋巴细胞瘤等【】。研究证实 感染与部分胃癌发生密切相关,淋巴上皮瘤样胃癌感染率高达%~%,在 普通胃腺癌中的感染率存在地区差异,约为%~%【一钉。原位杂交结果显示 组织中,几乎所有肿瘤细胞均可检测到而其它细胞则为阴性,提示 感染发生在胃癌形成的早期,肿瘤起源于感染细胞的单克隆增生【,】。进一 相比, 步研究发现与阴性胃癌 相关胃癌 具有独特的临床病理特征, 如发病呈低龄化趋势,发病部位多见于胃体或胃底贲门区,病理类型以管 状腺癌或低分化腺癌多见,组织类型弥散型胃癌多于肠型胃癌,淋巴结转移率低且 预后较好。与其它相关肿瘤如、’淋巴瘤等组织中病毒编码 基因的表达也不完全相同,如公认的细胞转化基因即潜伏膜蛋白 ,编码基因在中不表达【,。与以及其它 相关肿瘤之间的差异均提示有其独特的形成机制。 与其它肿瘤一样,肿瘤相关基因的功能异常是胃癌发生的重要生物学基础,胃 癌发生过程中常伴有多种