第七章 蛋白质生物合成.pptVIP

第五节 真核生物的翻译过程 真核生物蛋白质合成的大致过程与原核生物相同，也包括起始、延伸和终止三个阶段。 和原核生物相比，真核生物的核糖体结构更复杂，蛋白质合成过程有更多的蛋白质因子参与，对翻译过程的调控更加精细。 一、 真核生物蛋白质合成的起始 真核生物蛋白质生物合成起始过程需要甲硫氨酰－tRNAi、GTP、ATP和十几种起始因子（eIF）的参与。 真核生物蛋白质合成以甲硫氨酸起始，而且真核生物的mRNA没有Shine-Dalgarno序列。但大部分的真核生物mRNA具有5’帽子结构，指导起始因子搜索起始密码子与之结合。 真核生物蛋白质合成用于起始和延伸过程的Met-tRNAs的唯一区别在tRNA部分。 起始tRNAiMet具有独特的三级结构，而且其64位碱基G的核糖2’位置上是磷酸化的。这两个特征使起始Met-tRNAiMet(甲硫氨酰－tRNAi)与延伸过程中的Met-tRNAMet相区别。 真核生物蛋白质生物合成起始的过程 1. 80S核糖体的解离 2. 三元复合物和43S前起始复合物的形成 3. 43S前起始复合物与mRNA的结合 4. 起始密码子AUG的选择 5. 48S复合物与60S亚基的结合 1. 80S核糖体的解离 真核生物80S核糖体由60S大亚基和40S小亚基结合而成，三者之间存在一动态平衡。 起始因子eIF-3可与40S亚基结合，形成43S亚基； eIF-3与40S亚基的结合，还可以干扰40S亚基与60S亚基的结合。 eIF-1A对43S亚基有稳定作用。 eIF-3A可以与60S亚基结合，以阻止游离的60S和40S亚基的再结合(reassociation)。 eIF6也可以和60S亚基结合，阻止60S亚基与40S亚基的过早结合（premature binding）。 2. 三元复合物和43S前起始复合物 的形成 eIF-2结合GTP形成eIF-2-GTP二元复合物。此二元复合物不稳定，与Met-tRNAi结合后形成稳定的三元复合物eIF-2-GTP-Met-tRNAi 。 稳定的三元复合物与43S亚基结合形成43S前起始复合物，该过程还需要eIF-1A和eIF-3的参与。 43S前起始复合物与mRNA 的结合 eIF4是一个5’ 帽子结合蛋白，可以使43S前起始复合物与mRNA的5’末端结合，形成48S前起始复合物。 在结合mRNA前，三种起始因子eIF-4F、eIF-4B和eIF-4A共同作用，消除mRNA 5’非翻译区（5’-UTR）的分子内二级结构。 4. 起始密码子的选择 48S前起始复合物与mRNA的结合并不能使Met-tRNAi正好与AUG结合，AUG一般位于帽子结构下游的50～100核苷酸的位置。 Kozak（1978）提出一种识别AUG的机制 （Scanning Model of Initiation） 。 5. 48S前起始复合物与60S亚基的结合 48S前起始复合物在AUG处定位之后，在eIF-5的作用下，eIF-2-GTP水解为eIF-2-GDP，从而导致eIF-2-GDP和其他的eIFs由40S亚基上解离下来。 与60S亚基结合的eIF-3A和eIF6也释放。 40S亚基和60S亚基结合成80S复合物。 二、肽链的延伸 肽链的延伸是将mRNA的核苷酸序列翻译为多肽链氨基酸顺序的过程。翻译的准确性是肽链延伸过程的关键。 在真核生物中普遍存在着延伸因子1（elongation factor -1）和2（elongation factor -2）。真菌中还有延伸因子3（elongation factor-3）。 1. 延伸因子-1 eEF-1是一种多亚基蛋白质，由α、β、γ和? 4种亚基组成。eEF-1主要负责将氨基酰-tRNA转运至核糖体。 α亚基负责与氨基酰-tRNA结合，并需要GTP的参与。GTP可能是α亚基的变构激活剂。 β亚基具有核苷酸交换活性，类似于原核生物的EF-Ts。 2. 延伸因子-2 eEF-2是单体蛋白质分子，能与GTP结合，GTP为其发挥功能所必需的。 eEF-2对核糖体的亲和性有两种状态，高亲和性出现在移位前，低亲和性出现在移位后。 eEF-2与原核生物的EF-G类似，与移位过程相关。 eEF-2的活性还受糖基化和磷酸化等共价修饰的调节。 3. 延伸因子-3 eEF-3只在真菌中发现。由一条多肽链组成，具有结合和水解ATP和GTP的能力，两种活性位于同一活性位点。 eEF-3对每一轮延伸都是必需的，可能起到保证翻译准确性的作用。 延伸循环 真核生物肽链合成的延伸循环也可分为三个阶段，进位、转肽和移位。 氨基酰-tRNA是以eEF-1α-GTP-aa-tRNA三元复合物的形式进入A位的，并需要GTP的水解