HN禽流感假病毒体外中和试验技术平台的建立与应用.pdfVIP

中华临床感染病杂志２０１１年４月第４卷第２期　ＣｈｉｎＪＣｌｉｎＩｎｆｅｃｔＤｉｓ，Ａｐｒｉｌ２０１１，Ｖｏｌ．４，Ｎｏ．２ ·９１· ·论著 · ＨＮ禽流感假病毒体外中和试验 ５ １ 技术平台的建立与应用 张国良　周伯平　蔡车国　陈心春　杨桂林　陆坚　聂广　周保罗 　 　 　　【摘要】　目的　建立ＨＮ禽流感假病毒的体外中和试验技术平台，并系统评价２份ＨＮ人禽 ５ １ ５ １ 流感患者恢复期血清的中和效价。方法　通过磷酸钙沉淀法将转移载体 ｐＨＲＬｕｃ、包装载体 ｐＣＭＶ８．２和包膜载体ＣＭＶ／ＲＳＺ（或ＣＭＶ／ＲＴＨ）共转染人胚肾细胞（２９３Ｔ），７２ｈ后收集假病毒上 Δ 清液，免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）鉴定假病毒颗粒ＨＡ、Ｐ２４蛋白的表达，并取２００ Ｌ假病毒上清液测定 μ 感染活性。收集制备假病毒过程中整合ＨＡ蛋白的２９３Ｔ细胞，通过流式细胞术测定２份恢复期血清 中的ＨＡ抗体。利用２份恢复期血清分别与深圳株和泰国株假病毒进行中和试验，通过计算 ＩＣ 判 ５０ 断不同血清对２株假病毒中和效价的差异。结果　构建的２株假病毒颗粒不仅含有ＨＩＶ基质蛋白 Ｐ２４，还可以整合ＨＡ蛋白，并且能够由前体蛋白ＨＡ０裂解为具有生物活性的ＨＡ１和ＨＡ２。２００ Ｌ μ ４ 假病毒上清液感染靶细胞后ＲＬＡ值约为２×１０，具有较高的感染效价。ＦＡＣＳ检测结果显示２份血 清中均含有ＨＡ抗体，而且对不同分枝的假病毒具有交叉反应性。中和试验表明２份血清对深圳株 和泰国株假病毒均具有中和能力，而且对不同分枝的假病毒具有交叉中和活性，但对深圳株的中和效 价均高于泰国株。结论　本研究成功构建具有感染活性的深圳株和泰国株ＨＮ禽流感假病毒，并可 ５ １ 以快速、安全、高效的评价血清的中和效价，具有广阔的应用前景。 【关键词】　ＨＮ禽流感；　假病毒；　中和试验 ５ １ ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎａｓｓａｙｂａｓｅｄｏｎＨＮ ａｖｉａｎｉｎｆｌｕｅｎｚａｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅｄ ５ １  ｖｉｒｕｓｉｎｖｉｔｒｏ　ＺＨＡＮＧＧｕｏｌｉａｎｇ ，ＺＨＯＵＢｏｐｉｎｇ，ＣＡＩＣｈｅｇｕｏ，ＣＨＥＮＸｉｎｃｈｕｎ，ＹＡＮＧＧｕｉｌｉｎ，ＬＵＪｉａｎ，  ＮＩＥＧｕａｎｇ，ＺＨＯＵＢａｏｌｕｏ． ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＤｉｓｅａｓｅｓ，ＲｅｎｍｉｎＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＷｕｈａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｗｕｈａｎ４３００６０，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＺＨＯＵＢｏｐｉｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｓｚｄｓｙｙ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎａｓｓａｙｂａｓｅｄｏｎＨＮ ａｖｉａｎｉｎｆｌｕｅｎｚａｐｓｅｕｄｏｔｙｐｅｄ ５ １ ｖｉｒｕｓｉ