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WWAVE生物反应器中临床级T淋巴细胞的快速生产AVE生物反应器中临床级T淋巴细胞的快速生产 应 用 文 本案例研究使用基于微球或细胞的人造抗原呈递细胞 细细胞分离和扩充的体外制造过程胞分离和扩充的体外制造过程 献 (aAPC)，对T淋巴细胞（图1）静置培养和在WAVE Bioreactor TM 中大规模扩充进行了描述和比较。较之静置培养，T淋巴细 临床级扩充从研究对象或健康供体分离出外周血单核 29 胞在WAVE中的灌注培养能在较低的细胞培养体积的情况下 细胞（PBMC）开始。PBMC经过清洗常常会使细胞类型减 使细胞达到更高的密度。这样节省了在处理和收获时付出 少。按照每个细胞三个微球的比率，添加带有抗CD3抗CD 的劳动，并且降低了使用一次性产品的成本。描述的这些 28 9.3Mab[1;2]涂层的磁性聚苯乙烯微球，PBMC、淋巴细胞 方法是为T淋巴细胞增强效力和特殊功能的必要方法。能够 或富集T细胞受到激发分裂并生长。在补充了5%标准人类AB 为临床试验生产适量的细胞，预示着新一代的灌注疗法的 血清、2mM左旋谷氨酰胺、20mM HEPES以及100IU/mL rhIL-2 诞生。 的X-VIVOTM 15培养基中培养细胞。在透气塑料袋或培养瓶中 添加细胞混合物、生长培养基、载体（如果是转基因方法） 以及aAPC ，将其置于37℃， CO2浓度为5%的湿润培养器中。 在静置培养的数日中，添加新鲜的培养基，把细胞密度维持 6 在适当的范围内（约0.5-1.5×10 细胞/ml ），接着根据需要， 通过无菌连接件将其转移到另外的细胞培养袋中。 激发前和培养末期细胞的显型通过流式细胞仪进行监 控，用CellQuestTM软件取得并用CellQuest或flow Jo软件分 析。用荧光标记的单克隆抗体进行白血球免疫分型，这些 单克隆抗体包括：CD3 （SK7, IgG1 ）、 CD4 （SK3,IgG1 ）、 CD8 （SK1, IgG1 ）、CD19 （HIB19, IgG1 ）、CD45 （2D1, IgG1）、 CD16 （3G8, IgG1 ）以及CD45 （HI30, IgG1）。 WWAVE生物反应器的集成AVE生物反应器的集成 虽然T淋巴细胞可在最大有效容积为~1500ml的静置袋 9 图1. T淋巴细胞和带抗体涂层的微球 中培养，2×10 个细胞以上的细胞培养需