逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体基因和绿色荧光蛋白基因在BHK-21细胞中的表达.pdfVIP

畜牧兽医学报 2009，40(3)：376—382 ActaVeterinariaetZootechnicaSinica 逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体基因和 绿色荧光蛋 白基 因在 BHK一21细胞中的表达 李 炯，刘艳红 ，安芳兰，刘俊林，刘湘涛，尚佑军，殷 宏 (中国农业科学 院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学 国家重点实验室 ／ 农业部畜禽病毒学重点开放实验室 ／农业部草食动物疫病重点开放实验室，兰州 730046) 摘 要 ：为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋 白哺乳动物细胞表达体系，将El蹄疫病毒 (FMDV) 衣壳前体基 因(P1)和绿色荧光蛋 白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体 pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体 pBABEpuro—Pl一2A—EGFP。将重组逆转录病毒载体和 pVSV-G质粒载体共转染 GP2—293包装细胞 ，用产生的重组 逆转录病毒感染幼仓鼠肾细胞 (BHK一21)。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋 白的表达 ，用嘌呤霉素筛选抗性细胞 ，间 接免疫荧光方法检测细胞 中FMDV衣壳前体蛋 白的表达 。结果表明，重组逆转录病毒载体 pBABEpuro—P1—2A— EGFP构建正确 ，绿色荧光蛋 白和 FMDV衣壳前体蛋 白在细胞 中能稳定表达。FMDV衣壳前体蛋 白基 因细胞表 达体系的成功建立为进一步开展 口蹄疫亚单位疫苗的研制奠定了基础。 关键词 ：逆转录病毒载体 ；口蹄疫病毒 ；衣壳前体基因；绿色荧光蛋 白基 因；BHK21细胞 中图分类号：$852．659．6；Q78 文献标识码 ：A 文章编号：O366—6964(2009)03-0376—07 ExpressionoftheCapsid PrecursorProteinGeneofFoot-and-mouth DiseaseVirusandGreenFluorescentProteinGenein BHK-21CellsM ediatedbyRetroviralVector LIJiong，LIU Yan—hong ，AN Fang—lan，LIU Junlin， LIU Xiang—tao，SHANGYou—jun，YIN Hong (StateKeyLaboratoryofVeterinaryEtiologicalBiology，KeyLaboratoryof AnimalVirologyofMinistryofAgriculture，KeyLaboratoryofGrazingAnimal DiseaseofMinistryofAgriculture，LanzhouVeterinaryResearchInstitute， ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Lanzhou730046，China) Abstract：Hereweconstructedaretroviralvectormediatedmammalian cellexpressionsystem of thecapsidprecursorproteinoffoot—and—mouthdiseasevirus(FMDV)．Therecombinantretrovi— ralvectorpBABEpuro—P1—2A—EGFP wasconstructed by inserting capsid precursorprotein gene (P1)ofFMDV andenhancegreenfluorescentproteingene(EGFP)intopBABEpurobyturns． BoththerecombinantretroviralvectorandthepVSV—G plasmidwereCO—transf