生化工艺第四章灭菌与空气净化.pptVIP

第二节 空气净化 　 三、无菌检测及发酵废气废物的安全处理 　 1．无菌检测 　 工业生产中，为明确责任、跟踪生产进程、及早发现染菌等问题，一般在菌种制备、发酵罐接种前后和培养过程种都按时采样、尽情无菌检测。对发酵液的无菌检测有三种方式：无菌试验、镜检、试剂盒检验。 　 无菌试验有肉汤培养法、双蝶法、斜面培养法等。肉汤法是直接用装有酚红肉汤的无菌试管取样，37℃培养，观察培养基颜色的变化，确定是否染菌。双蝶法是取样在双蝶培养基上划线，取样培养6 h后反复划线，培养24h后观察有无菌落。斜面培养法是接种于斜面上，培养24h后观察有无菌落。 第二节 空气净化 　 镜检采用显微镜直接观察取样中有无杂菌，明显的优势是快速，但染菌初期或杂菌少时无法确定，一般与肉汤法配合使用。 　 试剂盒是近几年出现的快速、高效检测灭菌效果和染菌的新手段。 空气系统的无菌检测主要考察过滤器是否失效。过滤器失效的检测方法一是检测过滤器两侧的压降，压降大说明过滤介质被堵塞；二是用粒子计数器测定空气中的粒子数是否超标，有无达到洁净度要求。　 第二节 空气净化 第 2．发酵废气废物的安全处理 　　发酵过程中，发酵罐不断排出废气，其中夹带部分发酵液和微生物。中小型试验发酵罐厂采用在排气口接装冷凝器的方法回流部分发酵液，以避免发酵液体积的大幅下降。大型发酵罐的排气处理一般接到车间外经沉积液体后从“烟囱”排出。当发生染菌事故后，尤其发生噬菌体污染后，废气中夹带的微生物一旦排向大气将成为新的污染源，所以必须将发酵尾气进行处理。 第一节 灭菌 加热后通过保温将培养基维持灭菌温度一段时间，这是杀灭微生物的主要过程。其设备有维持罐和管式维持器两种。保温设备一般用保温材料包裹，但不直接通入蒸汽。管式维持器的优是管的直径较小，物料可一直沿管子向前流动，先进先出，不会返混；而维持罐由于直径远大于进料管，培养基在罐内混合，不能作到先进先出，返混现象严重，因而延长了保温时间。 保温结束以后，必须迅速降温至接近培养温度（40～45℃），避免培养基营养成分的破坏。国内大多数采用喷淋冷却器，也有采用螺旋版换热器、板式换热器、真空冷却器等。 第一节 灭菌 连续灭菌的理论灭菌时间计算可沿用对数残留定律，如忽略升温的灭菌作用，保温时间为 或 （4-10） 式中C0、Ct分别式单位体积培养基在灭菌前后的或菌数，个/ml 例4-3 若将例4-1中的培养基采用连续灭菌，灭菌温度为131℃，求灭菌所需的维持时间。 解 k=0.237 s-1=14.23 min-1 C0=2×105 个/ml Ct=0.001/（40×106）=2.5×10-11 个/ml min 第一节 灭菌 可见，灭菌温度升高10℃后采用连续灭菌则保温时间大为缩短。 如果采用维持罐保温的还必须考虑返混的情况，为确保灭菌效果，实际维持时间常取理论灭菌时间的3～5倍。 4．影响培养基灭菌的因素 影响培养基灭菌的因素除了所污染杂菌的种类、数量、灭菌温度和时间外，培养基成分、pH值、培养基中颗粒、泡沫等对培养基灭菌也有影响。 （1）培养基成分 油脂、糖类及一定浓度的蛋白质增加微生物的耐热性，高浓度有机物会包于细胞的周围形成一层薄膜，影响热的传递，因此在固形物含量高的情况下，灭菌温度可高些。例如，大肠杆菌在水中加热60～65℃便死亡；在10％糖液中，需70℃4～6min；在30％糖液中需70℃ 30min。 第一节 灭菌 低质量分数(1％～2％)的NaCl溶液对微生物有保护作用，随着质量分数的增加，保护作用减弱，当质量分数达8％～10％以上则减弱微生物的耐热性。 （2）pH值 pH值对微生物的耐热性影响很大。pH值6.0～8.0，微生物最耐热；pH＜6.0，氢离子易渗入微生物细胞内，从而改变细胞的生理反应促使其死亡。所以培养基pH值愈低，灭菌所需的时间愈短，见表4-4。 第一节 灭菌 表4-4 pH值对灭菌时间的影响 温度/℃ 孢子数/（个/ml） 灭菌时间/min pH值6.1 pH值5.3 pH值5.0 pH值4.7 pH值4.5 120 10000 8 7 5 3 3 115 10000 25 25 12 13 13 110 10000 70 65 35 30 24 100 10000 740 720 180 150 150 第一节 灭菌 （