刚地弓形虫GJS株微线体蛋白3基因真核表达质粒的构建及在BHK-21细胞中的表达.pdfVIP

中国兽 医科学 2009，39(02)：125—129 ChineseVeterinaryScience 中图分类号：S852．723 文献标志码 ：A 文章编号 ：1673—4696(2009)02—0125—05 刚地 弓形虫GJS株微线体蛋白3基因真核表达质粒 的构建及在 BHK一21细胞 中的表达 张燕丽 一，曹丽艳 一，芦 赘 ，苟惠天 ，王艳华 ，付宝权 ，李文卉。，张德林 (1．甘肃农业大学 动物医学院，甘肃 兰州 730070；2．中国农业科学院 兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学 国家重点实验室 农业部兽医公共卫生重点开放实验室 甘肃省动物寄生虫病重点实验室 ，甘肃 兰州 730046) 摘要 ：采用 PCR技术从刚地 弓形虫GJS株基 因组 DNA 中扩增微线体蛋 白3(MIC3)基 因，并克隆到 pMD18一T载体，经PCR、酶切及测序鉴定后 ，阳性重组质粒酶切并亚克隆到真核表达载体 pcDNA3．1(+)后 进行 PCR、酶切及测序鉴定。将重组质粒转柒 BHK-21细胞 。间接免疫荧光染色证明，质粒 DNA成功转染 到细胞 中并得以表达。Western—blot分析证实，细胞裂解液及上清样品中有 1条约 39．2ku的条带，可被 山 羊抗刚地 弓形虫超免疫血清所识别 ，大小与预测值相符 。表明，真核表达质粒 pcDNA3一MIC3中的MIC3基 因在 BHK一21细胞 中获得表达且表达产物具有抗原性 。 关键词 ：刚地 弓形虫；微线体蛋 白3；基因克隆；真核表达 Construction and expression-in_B‘HK_-21-。cellsofeukaryoticexpression plasmidwithM IC3geneofToxoplasmagondiiGJSstrain ZHANG Yan-li一，CAO Li～yan ，IU Yun ，GOU Hui～tian ，W ANG Yan—hua ， FU Bao—quan。，LIW en—hui，ZHANG De～lin (1．CollegeofVeterinaryMedicine，GansuAgriculturalUniversity，Lanzhou730070，China；2．KeyLaboratoryof VeterinaryParasitologyofGansuProvince／KeyLaboratoryofVeterinaryPublicHealthoftheMinistryof AgrcZ“rP／S搬 KeyLaboratoryofVeterinaryEtiologicalB0Zog ／Ln ^0“VeterinaryResearch Institute，ChineseAcademy0fAgriculturalSciences，Lanzhou730046，China) Abstract：Thegeneencodingmicronemeprotein3(M IC3)wasamplifiedbyPCR from thegenomic DNA ofToxoplasmagondiiGJSstrainandclonedintothevectorpMD18一T．AfteridentificationbyPCR， restrictiondigestionandsequencing，thepositiveplasmidwasdigestedand theM IC3 genewassubcloned intoaneukaryoticexpressionvectorpcDNA3。1(+)．TherecombinantplasmidpcDNA3一M IC3wasidenti— fiedbyPCR，restriction enzymedigestion andsequencinganalysis．Then，thepcDNA3一M IC3plasmidwas transfected into BHK一21 cells mediated by Lipofectam ine 2000．An indirect immunofluorescence test showedthattherecombinantplasmidwasexpressed inBHK一21cells．W e