嗜水气单胞菌外膜蛋白W基因的表达及其免疫原性分析.pdfVIP

微生物学通报 MAR 20, 2011, 38(3): 437−445 Microbiology China © 2011 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 主编点评文章 嗜水气单胞菌外膜蛋白W基因的表达及其 免疫原性分析 1,2 1* 1 1 1 1,2 1 刘明智 叶星 田园园 马冬梅 张莉莉 迟妍妍 邓国成 (1. 中国水产科学研究院珠江水产研究所 广东 广州 510380) (2. 上海海洋大学 上海 201306) 摘 要: 从患暴发性败血病的草鱼病灶处分离鉴定了嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila ) Wp3 菌 株。以其基因组DNA 为模板扩增外膜蛋白W 基因(OmpW), 该基因全长为865 bp, 开放式阅读框 (ORF)为615 bp, 与标准株ATCC7966 的OmpW 基因的同源性为99.8% 。根据ORF 序列设计引物 扩增OmpW 成熟肽编码序列并将其插入到表达载体pQE30 中, 转化大肠杆菌, 经诱导可表达分子 量为 24.7 kD 的带 His 标签的融合外膜蛋白 His-W 。用此融合蛋白免疫草鱼, 所得草鱼血清经 ELISA 分析显示呈现阳性反应, 说明重组蛋白能诱导产生抗体。采用实时荧光定量PCR 分析草鱼 头肾组织IgM 基因表达水平的变化, 结果显示免疫组IgM 的表达量均明显高于空白组, 其中低浓 度免疫组(2 μg/g)与空白对照组的差异显著(P0.05), 说明融合蛋白可使草鱼产生良好的免疫应答 并上调抗体基因表达、产生高效抗体。保护性实验显示, 不同免疫剂量均可使免疫组获得较高保 护率(57%−86%)。结果显示, 重组嗜水气单胞菌外膜蛋白W 可作为草鱼嗜水气单胞菌基因工程亚 单位疫苗。 关键词: 嗜水气单胞菌, 外膜蛋白W, 克隆, 基因工程表达, 免疫原性, IgM, 保护率 Expression and immunogenicity analysis of the outer membrane protein W gene of Aeromonas hydrophila LIU Ming-Zhi1,2 YE Xing1* TIAN Yuan-Yuan1 MA Dong-Mei1 ZHANG Li-Li1 CHI Yan-Yan1,2 DENG Guo-Cheng1 (1. Pearl River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fisheries Sciences, Guangzhou, Guangdong 510380, China) (2. Shanghai Ocean University, Shanghai, 201306, China) 基金项目：广东省重点科技项目(No. 2008A020100016); 广东省海洋渔业科技项目(No. A200899F01); 广州市科技项目