实验78槐花米中芦丁提取与鉴定.docVIP

综合实验 槐花米中芦丁的提取与鉴定 （一）实验目的 (1)通过芦丁的提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理和操作。 (2)掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷的检识方法。 (3)掌握快速柱层析法的操作。 (4)掌握由芦丁水解制取槲皮素的方法。 （二）实验原理 芦丁((rutin)亦称芸香苷（rutinoside），为黄酮苷，广泛存在于植物中，其中以槐花米(为槐树Sophora japnica，的花蕾)和乔麦叶中含量较高。芦丁的主要药理作用有抗炎作用、维P样作用及抗病毒作用，具有维持血管抵抗力，释低其通透性，减少脆性的作用；对脂肪肝有去脂的作用，与谷胱甘肽合去脂作用更明显；对于放射性伤害所引起的出血症也有一定治疗作用；临床上只要作防治高血压的辅助药物，毛细血管性止血药。芦丁水解后可生成槲皮素，槲皮素有一定的平喘作用；此外还有降低血压，增强毛细血管抵抗力，减少毛细血管脆性，降血脂，扩张张冠动脉，增加冠状动脉血流量的作用。 槐花米中含芦丁8%~28%，槐花米甲素sophorin A 14% ，槐花米乙素sophorin B 1. 25%，槐花米丙素sophorin C 0. 35%，也含槲皮素quercetin、白桦脂醇betulin，槐二醇sophoradiol等。 本实验以常用中药槐花米为原料，对其主要成分芦丁进行提取分离及鉴定。根据芦丁分子中具有酚经基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提液加酸后加酸酸化则芦丁游离析出(碱溶酸沉法)，然后也可通过快速柱层析法对粗品进行纯化。 芦丁:R=—葡萄糖—鼠李糖；槲皮素，R= H (三)实验步骤 1.芦丁的提取 于250mL烧杯中加人60 mL石灰水溶液，0. 25 g硼砂，置于石棉网上加热至微沸后，加入5g槐花米粗粉，保持微沸30 min(不断搅拌)后，趁热用棉花过滤，滤再趁热抽滤。滤渣再用40mL石灰水溶液同法操作两次。合并滤液，然后在60~70℃保温情况下，以15%盐酸液调节pH为3~4。静置至少2h，使沉淀完全，抽滤，沉淀用蒸馏水洗涤至中性，于燥，称量。 2.快速柱层析法分离纯化芦丁 称取0.15g芦丁粗产品，在通风橱中加少量甲醇热水浴溶解，拌人0.2g柱.层析硅胶H，热水浴挥发甲醇，然后于红外灯下烘于。 称取3g柱层析用硅胶H，装填于层析柱中，注意装填密实均匀，然后将所伴的样品均匀的铺在硅胶H上方，再加一层石英砂，快速柱即装填成功。配制2种洗脱液，然后加压洗脱。洗脱液a为:乙酸乙醋一丙酮( 2 ：1) 30 mL，b：乙酸乙酯-丙酮-乙酸（3 : 3 : 4）30 mL。先用a洗脱，再用b洗脱，每次接收8~10mL，收集洗脱组分并编号。 将少量芦丁粗产品、芦丁标样、槲皮素标样用乙醇溶解，作点样用。将上述步骤所收集得到的各组分与其进行薄层板对照，用乙酸乙醋一丁酮一冰醋酸一水（5：3：1：1）混合溶剂为展开液展开，确定各组分的成分。加压过柱可变成减压过柱或常压过柱（可将填柱的硅胶增加至8-10g) 3.芦丁粗品的重结晶 将剩余粗品按在热水中1:200的溶解度加蒸馏水进行重结晶。将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸15min，趁热过滤。滤液充分静置析出晶体，抽滤，60~70℃干燥，称量。测定熔点和红外光谱，与标准品对照。 4.芦丁水解槲皮素 称取3g得到的芦丁纯品溶于95%乙醇中(每1g芦丁需加约35 mL乙醇)，加入1mol/LH2 S04溶液(每1g芦丁需加约80 mL)水浴回流1h(薄层层析检查水解完全)。待全部水解后，蒸去乙醇，冷却、抽滤、水洗、抽干、干燥称量，计算得率。粗品可再用乙醇重结晶一次(黄色针晶)。 5.性质试验 （1）盐酸-镁粉反应：取少量芦丁，加数滴乙醇溶解，加5滴浓盐酸，再加少量镁粉，观察颜色变化。 （2）醋酸铅沉淀反应：取芦丁少许溶于热水，加乙酸铅试剂数滴，观察结果。 （3）莫里斯克氏反应:分别取芦丁和槲皮素少量，置2支试管中加乙醇数滴，加a-萘酚几滴震摇使其溶解，倾斜试管，沿管壁滴加浓硫酸5滴，静置，观察两层溶液界面处颜色变化，并比较芦丁和槲皮素的区别。 思考题 1.加入石灰水的的目的是什么?用15%盐酸溶液调酸度时为何控制pH大小? 2.加入硼砂的目的? 3.黄酮类化合物还有那些提取方法？本实验中芦丁还可用何种方法提取？ 4.本实验中快速柱色谱和薄层色谱的原理是什么?解释化合物结构与Rf值得关系。 第 1 页 共 4 页