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实验七、理化因素对微生物生长的影响 实验目的 1、学习和掌握研究理化因素对微生物生长的影响 2、学习和掌握利用浊度法测量微生物生长的方法； 3、了解不同pH对大肠杆菌生长的影响。 研究方法：利用液体培养——定量测定生长量 定量测定微生物生长量的常用方法 浊度法 重量法 显微镜直接计数法 菌落计数法 浊度法 原理：在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与光吸收值(OD)成正比，菌数越多， OD越大。因此，借助于分光光度计，在一定波长下测定菌悬液的OD ，就可反应出菌液的浓度。 测定方法：测定细胞培养物在600nm光吸收 优缺点 适应范围：单细胞无分支的微生物生长的测定 注意事项： 重量法 原理：将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出来,然后烘干至恒重(干燥温度可采用105℃、100℃或80℃)、称重。 优缺点：快速、简便；但易受干扰。 适应范围：丝状微生物生长的测定 测定方法 干重法 湿重法 注意事项 显微镜直接计数法 不足： 不能区分死细胞和活细胞，应用范围较窄 一些小的细胞在显微镜下很难看到； 样品中菌液浓度不能低于106个/mL 不能用于菌丝体或呈链状而不分散的微生物测定。 平板菌落计数法 实验操作步骤 配制牛肉膏蛋白胨液体培养基（每组500mL） 分装于6个三角瓶中（50mL/瓶） 将上述培养基中pH分别调到3、5、7、9、11、13（每种样品留出10ml以作空白） 包扎 121度灭菌20分钟，冷却 接种（0.5ml/瓶大肠杆菌过夜培养物） 37度恒温震荡培养24小时，测定光吸收值（OD600) 实验报告要求 格式：按照正式发表论文格式 题目：环境中四大类细胞型微生物的分离和生物学性质研究 作者，学号 摘要：主要方法和和主要结果 前言（为什么要进行该实验，要达到什么目的等） 实验方法（培养基配制、采样、分离、纯化、性质研究（菌株形态结构观察、大小测定、生理生化实验、环境因素影响等） 实验结果：分离实验结果、形态结构和培养特征观察结果、初步鉴定结果、革兰氏染色结果，大小测定结果和其他性质研究结果等。 分析与讨论 参考文献 要求文字简练 * 特点： 快速、简便；但易受干扰。 优点： 简单、快速；重复性高 优点 灵敏度高 可以区分死活细胞 应用广 食品、饮料等微生物检查 消毒灭菌效果检查 不足 测定的结果误差也较大。 操作也比较烦琐 需要的时间较长 *