超声萃取——RP-HPLC法测定不同产地青蒿中青蒿素的含量.docVIP

超声萃取—反相液相色谱法测定 不同产地青蒿中青蒿素的含量* 张海容 李金平 王迎进 陈金娥 (山西省忻州师范学院生化分析技术研究所 034000) 摘 要 建立超声萃取反相液相色谱（RP-HPLC）测定青蒿中青蒿素。采用Kromasil C18柱（150mm×4.6mm,5μm）, 甲醇-0.2mol/L 醋酸钠-醋酸缓冲液(pH=5.8, 体积比62∶38)为流动相;检测波长:260 nm ; 流速:0.8 mL/min;柱温:30℃。 实验表明不同省份青蒿素含量差异很大, 同一省份不同地区青蒿样品的青蒿素含量也有差异。如湖南怀化(0.222%)＞北京(0.129%) ＞重庆(0.128%)＞忻州盂县(0.0880%)＞忻州盂社(0.0812%)＞忻州东楼(0.0742%)＞忻州宁武(0.0736%)＞忻州高村(0.0701%) ＞忻州卢野(0.0700%)，本地家种(0.110%)＞本地野生(0.0723%),该法准确可靠、重现性好。 关键词 超声萃取; RP-HPLC; 青蒿素 中图分类号：R917；文献标识码：A 青蒿素是目前中药制剂中唯一能被说明分子结构并对疟疾治疗具有神奇疗效的药品。青蒿素及其衍生物具有高效低毒的抗疟活性，它的发现成为世界抗疟药史上继奎宁之后的又一个重要里程碑[1]。到目前为止，已有多种测定青蒿素含量的方法见于文献[2-8]，如薄层层析扫描法、高效液相色谱法、薄层层析-紫外分光光度法、碘量法、柱层析重量法及气相色谱法。这些不同方法均存在着一定的缺点，如分析速度慢、成本高、过程复杂等。超声波应用于天然活性成分萃取是生物技术领域的重要手段之一。与常规溶剂萃取相比，超声波不仅可以大大缩短提取时间，而且还可以降低溶剂消耗[2]。本文尝试用RP-HPLC法[9-11]测定青蒿素的含量，为进一步挖掘青蒿素资源、提高工业化生产效率提供一定的实验依据。 1实验部分 1.1仪器与试剂 岛津LC-20AT液相色谱仪， Kromasil C18柱（150mm×4.6mm,5μmKQ-100DB型数控超声波清洗器，微孔过滤膜（水系，0.45μm；有机系，0.45μm）。 *山西省教育厅国际交流项目（2011-63）、忻州师范学院应用化学创新实践基地（2013-31）、山西省教育厅强校工程项目（2012089）、山西省忻州市科技研发项目(忻科发No.201231-20)资助 作者简介：张海容（1957-），男，山西河曲，忻州师范学院教授，博士。主要从事天然药物有效成分分离与分析研究工作。 通信联系人：tel:0350-3048913; E-mai: hairong1015@163.com Kromasil C18色谱柱（150mm×4.6mm,5μm）；柱温：30℃；流动相：甲醇-0.2mol/L醋酸钠-醋酸缓冲液（pH=5.8，体积比62：38），过0.45μm滤膜和超声脱气后使用；流速：0.8mL/min；检测波长：260nm；进样量：5μL。 分取一定体积的待测溶液，加入2g/L氢氧化钠溶液5mL，混合均匀后放入50℃的恒温水浴中30 min，以待青蒿素完全衍生化，取出冷却至室温，用0.08mol/L的醋酸定容至刻度，超声10min。用0.45μm滤膜过滤和超声脱气后的甲醇、流动相甲醇-0.2mol/L醋酸钠-醋酸缓冲液（pH=5.8，体积比62：38203 nm 处有较弱的末端吸收,但与碱反应后,分子内的过氧桥结构被破坏,重排形成共轭结构，产生一化合物Q292(B),该物质在292nm 处有最大吸收。化合物Q292 在pH 5.58～6.04条件下, 又可定量地转化为化合物Q260(C), 该物质在260nm处有最大吸收,所以HPLC图谱中有两个强峰，两个强峰峰面积之和即为青蒿素的含量。在上述条件下，青蒿素色谱峰与杂质色谱峰分离良好，保留时间适中且峰形较好，与文献[7]报道的结果一致。 2.2流动相的选择 流动相为乙腈: 醋酸盐缓冲液:甲醇, 配比分别为80:15:5,60:20:20,70:15:15时,在流速:1.0mL/min,柱温:30℃, 检测波长:260nm,进样量:5μL的条件下,灵敏度较低,保留时间较早,且色谱峰拖尾严重。流动相为甲醇-0.2mol/L醋酸钠-醋酸缓冲液（pH=5.8，体积比62：38mL/min,柱温:30℃, 检测波长:260nm,进样量:5μL的条件下,青蒿素色谱峰与杂质色谱峰分离良好,灵敏度较高,保留时间适中且峰形较好，实验选择流动相为甲醇-0.2mol/L醋酸钠-醋酸缓冲液。 2.3标准曲线与检出限 准确量取1.0(10-3g/mL 青蒿素对照品溶液0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4mL于10mL的比色管中，准确量取上述溶液5μL，注入液相