出生前暴露于甲基对硫磷和氯氰菊酯对F1代大鼠NMDAR1受体表达变化及DNA损伤的探讨.docVIP

出生前暴露于甲基对硫磷和氯氰菊酯F1代大鼠NMDAR1受体及DNA损伤的研究生：王静林 导师刘苹吴锡南【摘要】 目的：探讨暴露甲基对硫磷菊酯对鼠 方法：孕鼠随机分4组 4个水平，即为0 0.0230+0.8000mg/kg BW，0.0725+2.5265 mg/kg BW，8.0000+0.2300 mg/kg BW。在大鼠怀孕天到15天每日一次对孕鼠经口灌胃分别在子鼠出生后第7、14、21、28天每组随机抽取5只子，免疫组化染色测定子鼠大脑皮层、中脑、海马NMDAR1受体蛋白的表达在怀孕16天取出胎鼠和出生后30天鼠脑用胰蛋白消化，进行单细胞凝胶电泳，吖啶橙染色分析。 结果：出生后7天阳性锥体细胞多集中在大脑皮层的两侧底部，其它部位也有少存在免疫阳性反应细胞着色较浅。14天、21天、28天子鼠脑NMDAR1受体阳性细胞广泛分布于整个大脑皮层和海马，但以顶叶皮层内侧外侧、梨状区皮层、海马、中脑黑质网状结构阳性细胞数多，细胞形态清晰，着色深。在子鼠大脑皮层外侧中剂量组NMDA受体蛋白表达较对照组低P0.05)，表明在中剂量水平下调了NMDAR1受体蛋白的表达，在海马CA1（P0.0（P0.0随着甲基对硫磷和菊酯剂量，在海马CA1区的NMDA受体β1＝-0.377，P0.01），表明甲基对硫磷和菊酯对海马CA1区NMDAR1受体蛋白的表达有显著影响下调了NMDA受体蛋白表达。（P0.0与对照组相比较，剂量组受体蛋白表达高峰，在高剂量组后移。CA3区，14天子鼠脑NMDA受体在对照组低于低剂量组(P0.0)，高剂量(P0.05)，表明在低剂量水平，甲基对硫磷和氯氰菊酯混配可能上调了出生后14天子鼠海马CA3区NMDAR1受体蛋白的表达，随着剂量水平的升高NMDA受体蛋白表达反而下降；其它部位无统计学意义（P＞0.05）子鼠大脑皮层外侧、内侧、海马CA1、CA3在不同的时间NMDAR1受体蛋白表达不同（P＜0.05），对照组14天NMDA受体蛋白表达水平最低，21天到高峰，28天有所下降，在三个剂量组蛋白表达高峰后移，并随着剂量水平的升高NMDA受体蛋白表达高峰后移特别明显。1/95LD50~1/30LD50剂量(P0.05)，在高剂量水平可引起出生后30天胎鼠神经细胞DNA的断裂(P0.05)，DNA损伤程度和彗星样细胞出现率与甲基对硫磷和菊酯剂量之间存在正相关关系相关分析DNA损伤程度r1=0.836,P=0.000; 彗星样细胞出现率r2=0.849,P=0.000。出生后30天子鼠脑DNA损伤程度r3=0.865,P=0.000; 彗星样细胞出现率r4=0.969,P=0.000），即随着甲基对硫磷和菊酯混配的增加DNA损伤程度加重以及细胞比例也结论 ：大鼠出生前暴露于甲基对硫磷氯氰菊酯混配下调了子鼠脑皮层外侧、海马CA1、CA3 NMDAR1蛋白表达，干扰了子鼠NMDA受体的正常表达过程，延迟了受体蛋白的表达高峰；大鼠出生前暴露于甲基对硫磷氯氰菊酯混配引起脑细胞DNA链断裂损伤，呈剂量－应关系,这种效应可能持续一段长的时间。 关键词：甲基对硫磷 氯氰菊酯 混配农药 NMDAR1 DNA损伤 单细胞凝胶电泳技术（SCGE） The Expression of NMDAR and The DNA Damage of Nerve System Combined Cypermethrion and Mythylparathion Postgraduate: WANG Jinglin Superviser: Prof. LIU Ping, Prof. WU Xinan Abstract: Object: To detect the expression of NMDAR1 and the DNA damage of nerve system in offsprings of rats after prenatal exposured to combined Cypermethrion and Mythylparathion. Methods: 47 pregnant rats were devided into four groups randomly, i.e, control group and three combined pesticides treated groups 1/300LD50, 1/95LD50 and 1/30LD50 which corresponding to four level of doses: 0, 0.0230+0.8000mg/kg BW, 0.0725+2.5265mg/kg BW and 8.0000+0.2300mg/kg BW. From the