原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
实验十九、食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定
1、目的与要求
掌握用薄层色谱法测定食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的方法；同时掌握高效液相通色谱的使用原理及方法。
2、原理
试样经提取、浓缩、薄层分离后，在365nm紫外光下，黄曲霉毒素B1、B2产生蓝紫荧光，黄曲霉毒素G1、G2产生黄绿色荧光，根据其在薄层板上显示的荧光的最低检出量来定量。
3、试剂
3.1 三氯甲烷。
3.2 正已烷或石油醚(沸程30℃～60℃或60℃～90℃)。
3.3 甲醇。
3.4 苯。
3.5 乙腈。
3.6 无水乙醚或乙醚经无水硫酸钠脱水。
3.7 丙酮。
以上试剂在试验时先进行一次试剂空白试验，如不干扰测定即可使用，否则需进行重蒸。
3.8 硅胶G：薄层色谱用。
3.9 三氟乙酸。
3.10 无水硫酸钠。
3.11 氯化钠。
3.12 苯-乙腈混合液：量取98mL苯，加2mL乙腈，混匀。
3.13 甲醇水溶液：55+45
3.14 次氯酸钠溶液(消毒用)：取100g漂白粉，加入500mL水，搅拌均匀。另将80g工业用碳酸钠(Na2CO3?10H2O)溶于500mL温水中，再将两液混合、搅拌，澄清后过滤。此滤液含次氯酸浓度约为25g/L。若用漂粉精制备，则碳酸钠的量可以加倍。所得溶液的浓度约为50g/L。污染的玻璃仪器用10g/L次氯酸钠溶液浸泡半天或用50g/L次氯酸钠溶液浸泡片刻后，即可达到去毒效果。
3.15 苯-乙醇-水(46+35+19)展开剂：取此比例配制的溶液置于分液漏斗中，振摇5min，静置过夜。将上下层溶液分别置于具塞瓶中保存，上下层交界的溶液弃去不要。若溶液出现混浊，则在80℃水浴上加热，待清晰后，即停止加热，取上层溶液作展开剂用。另取一定量的下层溶液置小皿中，再放于展开槽内。将薄层板放入展开槽内，预先饱和10min后展开。
3.16 硫酸(1+3)。
3.17 黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准溶液如下：
3.17.1 单一标准溶液(10μg/mL)：准确称取黄曲霉毒素B1、G1标准品各1mg～1.2mg，黄曲霉毒素B2、G2标准品各0.5mg～0.6mg，用苯-乙腈混合液作溶剂。
3.17.1.1 仪器校正：测定重铬酸钾溶液的摩尔消光系数，以求出使用仪器的校正因素。准确称取25mg经干燥的重铬酸钾(基准级)，用硫酸(0.5+100)溶解后并准确稀释至200mL，相当于[c(K2Cr2O7)=0.0004mol/L]。再吸取25mL此稀释液于50mL容量瓶中，加硫酸(0.5+100)稀释至刻度，相当于0.0002mol/L溶液。再吸取25mL此稀释液于50mL容量瓶中，加硫酸(0.5+100)稀释至刻度，相当于0.0001mol/L溶液。用1cm石英杯，在最大吸收峰的波长(接近350nm)用硫酸(0.5+100)作空白，测得以上三种不同浓度的摩尔溶液的吸光度，并按下式计算出以上三种浓度的摩尔消光系数的平均值。
式中：
E1—重铬酸钾溶液的摩尔消光系数；
A—测得重铬酸钾溶液的吸光度；
c—重铬酸钾溶液的摩尔浓度。
再以此平均值与重铬酸钾的摩尔消光系数值3160比较，即求出使用仪器的校正因素，按下式进行计算。
式中：
f—使用仪器的校正因素；
E—测得的重铬酸钾摩尔消光系数的平均值。
若f大于0.95或小于1.05，则使用仪器的校正因素可忽略不计。
3.17.1.2 将3.17.1.1中的黄曲霉毒素B1标准溶液约为10μg/mL。用紫外分光光度计测此标准溶液的最大吸收峰的波长及该波长的吸光度值。结果计算如下：
式中：
X—黄曲霉毒素B1标准溶液的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL)；
A—测得的吸光度值；
M—黄曲霉毒素B1的分子量312；。
f—使用仪器的校正因素；
E2—黄曲霉毒素B1在苯-乙腈混合液中的摩尔消光系数19800。
根据计算，用苯-乙腈混合液调到标准溶液浓度恰为10.0μg/mL，并用分光光度计核对其浓度。
3.17.1.3 纯度的测定：取5μl10μg/mL黄曲霉毒素B1标准溶液，滴加于涂层厚度0.25mmG薄层板上，用甲醇-三氯甲烷(4+96)与丙酮-三氯甲烷(8+92)展开剂展开，在紫外光灯下观察荧光的产生，应符合以下条件：
3.17.1.3.1 在展开后，只有单一的荧光点，无其他杂质荧光点。
3.17.1.3.2 原点上没有任何残留的荧光物质。
黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的分子量及用苯-乙腈作溶剂时的最大吸收峰的波长及摩尔消光系数见下表：
黄曲霉毒素名称 最大吸收峰波长/nm 摩尔消光系数 分子量 B1 346 19 800 312 B2 348 20 900 314 G1 353 17 100 328 G2 354
文档评论（0）